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有問有答| 一起探討基因合成、引物測序相關問題（分子講座完結篇）

信息來源：金開瑞作者：genecreate 發布時間：2020-07-13 09:30:55

上期講座Q&A

1、我想問下：為什么引物不能退火之后跑膠驗證純度呢？

兩條引物退火成功率達不到百分之百，里面會存在單鏈引物，引物退火后跑膠有雜鏈很正常，不能以此來判斷單鏈引物純度。

2、老師您好，我想自己設計測序引物，請問對于測序引物有什么要求嗎？

在待測目的基因前面100bp左右設計引物，GC含量不能太高或太低，3’端不能有錯配，引物的長度建議是18-20bp以內。

3、甲基化的建議反向測序,是什么意思?

正向測序有甲基化的結構，會導致測序峰圖雙峰或者嚴重的時候導致信號突然中斷，就可以反向測序，然后正反雙向測序結果拼接起來就可以得到完整的序列。

4、老師請問一個測序反應有效的大概有多長?

普通序列一個測序反應有效長度大概是800bp左右。

5、RNA能合多少呢

30bp以內。

6、稀釋后引物保存時間多久？

稀釋后的引物一般4℃保存3個月內是沒有問題的

7、你們的積分的兌換時間有限制嗎？

積分不清零的

8、測序為什么前70bp不準呢

一代測序，由于儀器的缺陷，所以前面會有幾十bp是不準確的，嚴重的時候會有70bp左右不準確。

9、引物最長能合多長呢？

引物最長能合139bp。

10、金開瑞引物合成與外面其他公司引物合成相比，優勢有哪些？

我們公司技術服務內容比較多，內部和外部引物合成需求都是一起合成，效果和質量的反饋方面，我們綜合有內部使用和外部使用反饋，更全面。

11、只做常規的pcr，用什么純化方式的引物呢?

常規的pcr脫鹽純化就可以滿足實驗了。

12、引物測序時，單向、雙向、測通之間的具體區別是什么呀？

這個主要是根據待測目的序列的長度來決定的，如果待測目的序列700bp以內的話可以選擇正向或者反向都行；1500bp以內的序列一般雙向測序就可以了；如果是待測目的序列大于1500bp就可以填測通，這邊會根據測序結果自動安排測序反應，直到完全測通，我們會默認測通后拼接。

13、不同純化方法,你們收費不一樣是嗎

不一樣的，脫鹽純化<PEGA純化<HPLC純化。

14、金開瑞收到測序樣品后一般最快多久出結果？

質粒和PCR產物24小時內出結果，菌液48小時內出結果。

15、講座回放和PPT怎么獲取？

講座PPT獲取方式：金開瑞微信公眾號回復引物測序

講座回放，掃碼即可觀看

下期講座預告

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