金開瑞為您介紹ELISA方法大全
信息來源：金開瑞 作者：genecreate 發(fā)布時間：2017-09-22 16:41:59
ELISA試劑盒種類繁多，根據(jù)原理可大致分為間接法、夾心法、競爭法、捕獲包被法（也稱為反向間接法，比較少見）。其中各類型試劑盒的基本原理可以參考：【蛋白研究系列專題】-12丨ELISA方法知多少？，以下為各類型ELISA試劑盒的抗原抗體連接順序及適用類型：
注：
▌：吸附介質(zhì)；/：競爭關(guān)系；-：結(jié)合
Ag：抗原（antigen）；sAg：固相抗原；lAg：游離抗原（即待測抗原）；Ag*：酶標抗原
Ab：抗體（antibody）；sAb：固相抗體；lAb：游離抗體（即待測抗體）；Ab*：酶標抗體（或酶標二抗）
lIgM：游離IgM
被測物以紅色表示
上面的方法涉及到的是比較簡單的方式，在實際運用中則會進行一些改良，下面舉幾個栗子！
直接法：直接用酶標抗體結(jié)合抗原，或者直接用酶標抗原結(jié)合抗體。間接法：間接用酶標二抗結(jié)合特異性識別抗原的抗體。下面的栗子幫助大家理解。
栗子1
表中列出的兩種夾心法屬于直接夾心法，間接夾心ELISA則是基于兩種不同種屬來源的抗體，與直接法相比具有更高的靈敏度，常用來檢測低豐度抗原樣本。間接夾心ELISA的抗原抗體連接順序為：▌-sAb1(species 1)-lAg-Ab2(species 2)-Ab*，當然也不一定非要不同物種的抗體，使用同一物種的抗體也可以是這樣的連接順序：▌-sAb Fab-lAg-lAb(same species)-anti Fc Ab*。
栗子2
競爭ELISA方法靈活性強，在實際應(yīng)用中衍生出了許多不同的檢測方式，除了表中列出的直接競爭法，還有間接競爭法、夾心競爭法等，這些方法是將間接法和夾心法進行重新組合得到的更為復雜的檢測方法。
間接競爭法的抗原抗體連接順序為：▌-sAg/lAg-Ab-Ab*，或者▌-sAg-Ab/lAb-Ab*酶標二抗。這種方法比直接法進一步放大信號，故靈敏度更高。
夾心競爭法從原理上分可以有四種，實際中運用的多是：▌-sAb-Ag/lAg-Ab*，例如ICTP檢測試劑盒就是用這種方法開發(fā)的。
栗子3
捕獲包被法應(yīng)用于TORCH檢測時，其抗原抗體連接順序為：▌-s anti IgM Ab-lIgM-Ag*，這樣省去了常規(guī)方法中的酶標抗體。
各種ELISA檢測方法各有利弊，針對不同的抗原、抗體的性質(zhì)，在開發(fā)試劑盒時需要根據(jù)各自的性質(zhì)進行設(shè)計和不同的嘗試，最終才能得到一個性能良好的試劑盒。
上一條：什么是抗體片段和抗體片段化
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