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客戶文獻解讀：PDCD5調控細胞增殖、細胞周期及細胞凋亡

信息來源：金開瑞作者：genecreate 發布時間：2018-04-12 10:16:32

題目：PDCD5 regulates cell proliferation, cell cycle progression and apoptosis

期刊：Oncology letters

影響因子：1.6

合作技術：慢病毒包裝，穩轉細胞株構建，細胞增殖、凋亡、周期檢測，WB

研究背景

PDCD5（Programmed cell death 5）是程序性細胞死亡蛋白家族成員，同腫瘤細胞生長及凋亡密切相關。為了研究PDCD5的分子及細胞功能，本文通過慢病毒載體構建了穩定過表達PDCD5的人表皮癌細胞A431細胞株，檢測了該細胞株的細胞增殖、細胞周期、細胞凋亡，并進一步驗證了PDCD5在腫瘤生長過程中是否通過p53行使相關功能。本研究說明了PDCD5在腫瘤發生過程中的分子功能，PDCD5作為腫瘤抑制因子,在腫瘤治療中可能成為潛在靶分子。

研究內容及結果

1. 慢病毒包裝及過表達穩轉株構建

本文所使用的PDCD5過表達慢病毒及穩定過表達PDCD5的A431細胞株訂購自武漢金開瑞生物工程有限公司（GeneCreate Biological Engineering Co.,Ltd）。通過WB及熒光定量PCR實驗證明PDCD5在A431細胞株中顯著過表達（Fig.1 A.B.C）。

圖1 PDCD5過表達水平檢測

2. MTT細胞增殖實驗

以空載體感染細胞為對照組、以PDCD5過表達A431細胞為實驗組進行MTT實驗，分別在12h、24h、48h、72h監測數據，繪制生長曲線，可見在72-96h時PDCD5過表達組的增殖顯著受到抑制（Fig.2）。

圖2 A431細胞增殖

3. 流式細胞術檢測細胞周期及凋亡

為了進一步研究PDCD5對于癌細胞增殖抑制的機制，利用PI染色后進行流式細胞術分析，結果顯示PDCD5過表達的A431細胞出現G2/M周期阻滯（Fig.3 A.B）。

圖3 A431細胞周期

為了考察PDCD5對于腫瘤細胞凋亡的影響，使用Annexin V/PI染色及流式細胞術檢測過表達PDCD5的A431細胞凋亡，顯示PDCD5過表達組凋亡比例顯著升高（Fig.4 A.B）。

圖4 A431細胞凋亡

4. WB及熒光定量PCR檢測PDCD5、P53及細胞凋亡相關通路蛋白表達水平

為了進一步研究PDCD5對于腫瘤細胞增殖抑制、周期阻滯的內在機制，通過WB和熒光素定量PCR檢測p53、bax、bcl-2、casp3在蛋白和mRNA水平的表達，發現p53、bax和casp3表達升高，bcl-2表達降低（Fig.5 A.B.C）。

圖5 PDCD5過表達細胞中p53、bax、bcl-2、casp3表達水平

文章小結

本文利用慢病毒構建的PDCD5穩定過表達A431細胞株為實驗模型，發現PDCD5過表達細胞體增殖受到抑制、細胞周期于G2/M期阻滯、細胞凋亡率增高。進一步研究證明PDCD5過表達細胞中p53表達水平升高，凋亡通路相關基因bax和casp3呈現過表達、bcl-2基因表達降低。PDCD5可能通過經典凋亡信號通路機制影響腫瘤的生長。

解析文獻

Penghui Li et al. PDCD5 regulates cell proliferation, cell cycle progression and apoptosis. Oncology letters,2017,15: 1177-1183

參考文獻

1. Hipfner DR and Cohen SM: Connecting proliferation and apoptosis in development and disease. Nat Rev Mol Cell Biol, 2004, 5: 805 815.

2. Löbrich M and Jeggo PA: The impact of a negligent G2/M checkpoint on genomic instability and cancer induction. Nat Rev Cancer, 2007, 7: 861 869.

3. Alenzi FQ: Links between apoptosis, proliferation and the cell cycle. Br J Biomed Sci, 2004, 61: 99 102.

4. Liu H, Wang Y, et al: TFAR19, a novel apoptosis related gene cloned from human leukemia cell line TF 1, could enhance apoptosis of some tumor cells induced by growth factor withdrawal. Biochem Biophys Res Commun, 1999, 254: 203 210.

5. Wang N, Lu HS, et al: Involvement of PDCD5 in the regulation of apoptosis in fibroblast like synoviocytes of rheumatoid arthritis. Apoptosis, 2007, 12: 1433 1441.

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