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如何選擇合適的單、多克隆抗體及抗原

信息來源：金開瑞作者：genecreate 發布時間：2018-06-22 11:07:26

多克隆抗體（polyclonal antibody, pAb）：用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動物，可刺激機體多個B細胞克隆，產生針對多種抗原表位的不同抗體。所獲得的免疫血清實際上是含有多種抗體的混合物，即多克隆抗體。單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體，稱為單克隆抗體。通常采用雜交瘤技術來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。

一、單多抗優缺點

類型	優點	缺點
多克隆抗體	1.多克隆抗體有助于放大低表達水平的靶蛋白信號； 2.能識別多個表位； 3.比單克隆抗體更能容許抗原中的微小變化； 4.識別出與免疫原蛋白質具有高同源性的蛋白質，或者從非免疫原物種的組織樣品中篩選靶蛋白； 5.多克隆抗體通常是檢測變性蛋白質的首選； 6.多表位通常可提供更為有力的檢測。	1.易于產生批次間差異； 2.產生大量非特異性抗體，有時可能在某些應用中產生背景信號； 3.不適用于探測抗原的特定結構域，因為抗血清通常可識別多個結構域。
單克隆抗體	1.雜交瘤制得后，就成為了恒定的再生源，所有批次都將相同； 2.切片和細胞染色造成的背景較低。 3.具有特異性，適于分析測定中的一抗或檢測組織中的抗原，并且通常所產生的背景染色顯著低。 4.同質性非常高； 5.單克隆抗體的特異性能使其在混合物中和抗原高效地結合。	1.可產生大量特異性抗體，但可能特異性過強； 2.經過抗原的化學處理后比多克隆抗體更易于丟失表位。這可通過使用同一抗原的兩個或多個單克隆抗體進行補償。

二、單抗和多抗的選擇

如果對抗體的特異性要求高，用量較大或需要長期使用一致的抗體，制備的抗體應用要求多（WB/IP/IF/ICC等)，可以選擇制備單克隆抗體。

多克隆抗體的特異性較差，即使是使用相同的抗原制備多抗，不同批次間也會存在差異，因而在特異性、一致性方面有很大的局限。所以在用多抗做免疫檢測時，更容易造成背景，例如在WB 中有雜帶，在IHC 中背景較深等等。雖然還存在著交叉反應的問題，但由于多抗識別多個抗原表位，即使是有少數幾個抗原表位被破壞或者抗原構象改變，實驗的結果也不會受到影響。另外多抗需要免疫原的量大，如果免疫原制備困難，建議制備單抗。

若對抗體的特異性要求不高，需要做沉淀和凝集反應的檢測性實驗或者只需做ELISA檢測，可以選擇制備多克隆抗體。

多抗相比較單抗仍然有制備時間短、首次制備成本低的特點，在一些情況下也是一種選擇。另外，在相同條件下，使用多抗可以提高檢測的靈敏度，對于豐度偏低的蛋白也更容易檢出。

三、抗原的選擇

抗原的選擇可以是天然蛋白、重組可溶蛋白、重組變性蛋白和多肽，抗原質量越高，最終制備高質量抗體的幾率也會越大！目前抗體制備常采用重組蛋白或多肽作為抗原。

常規情況下，重組蛋白作為抗原往往含有更多的抗原決定簇，既有空間表位，也會有線形序列表位，對于機體的免疫刺激也會相對充分一些，那么最終獲取應用面較廣的抗體幾率也會大很多，尤其是目的蛋白已證明有修飾或者復雜結構的，一般都會優先選擇重組蛋白。

當然也有必須用多肽制備的，比如對同源家族某一個蛋白抗體的制備，同源性非常高的，需要找到特異性aa合成多肽，再或者一些修飾化抗體，需要在多肽合成階段定點修飾某些AA來制備抗體。抗原多肽選擇一般遵循如下基本原則1.盡可能是在蛋白表面；2.保證該段序列不形成α-helix；3.N，C端的肽段比中間的肽段更好；4.避免蛋白內部重復或接近重復段的序列；5.避免同源性太強的肽段；6.交聯可以交聯在N，C兩端，選擇依據就是交聯在對產生抗體不太重要的一端；7.序列中不能有太多的Pro，但有一兩個Pro有好處，可以使肽鏈結構相對穩定一些，對產生特異性抗體有益。

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如何選擇合適的單、多克隆抗體及抗原