首頁集團概況技術專題

蛋白質組學-酵母雙雜交技術聯合研究蛋白互作變化

信息來源：金開瑞作者：genecreate 發布時間：2018-08-14 13:42:08

蛋白質作為生命活動實際執行的分子，在生物機理研究中處于非常重要的地位。隨著蛋白與表型的相關關系、因果關系被逐漸闡明，生物機理的研究往往需要深入到蛋白相互作用層面。如何選擇合適的蛋白分子，研究與之相互作用的蛋白網絡，從而闡釋生理過程也是科研實踐中的經典問題。另一方面，天然情況下的蛋白互作，可以采用Co-IP等技術進行檢測，然而對于植物、微生物、非模式動物等研究，往往缺乏合適的抗體，定制抗體周期長造價又高。
如何選擇合適的蛋白，如何在沒有抗體的情況下開展蛋白互作研究？這里，小編和大家一起分享一篇最新的文獻，一起來看一看蛋白互作研究“套路”吧。

基本信息
標題：Identification of proteins using iTRAQ and VIGS reveals three bread wheat proteins involved in the response to combined osmotic-cold stress
期刊：Journal of Proteome Research
主要技術：iTRAQ、酵母雙雜交（Y2H）

基本思路
生理實驗驗證表型——蛋白質組學鑒定差異表達蛋白——PPI分析蛋白互作——酵母雙雜交Y2H驗證蛋白互作
研究背景
非生物逆境壓力（Abiotic stress）對作物的影響巨大，其具體機制尚不明確。本文擬通過蛋白質組學與酵母雙雜交等技術，初步研究滲透壓-寒冷聯合脅迫對小麥生長影響的機制。
研究結果
1. 滲透壓-寒冷聯合脅迫影響小麥表型
對實驗材料滲透壓-寒冷聯合脅迫處理24小時，可以發現其高度、根系長度、根與葉的重量等一系列表型發生顯著的變化。

圖1 滲透壓-寒冷聯合脅迫對小麥表型的影響

2. 滲透壓-寒冷聯合脅迫影響小麥蛋白表達
分別提取實驗組（滲透壓-寒冷聯合脅迫處理）與對照組小麥根和葉片的蛋白，采用iTRAQ標記進行蛋白質組學研究，分別鑒定到3703（根）和3009（葉）個蛋白，其中差異表達蛋白分別為250（根）和258（葉）個。對差異蛋白分別進行GO和KEGG分析，從整體上分析差異表達蛋白的生理功能（圖2）。

圖2 差異表達蛋白的GO與KEGG通路分析

3. 差異表達蛋白的結合分析與驗證
對差異表達的蛋白分別進行蛋白-蛋白互作分析（PPI，圖3），揭示其蛋白互作網絡。選擇其中5組互作蛋白，采用酵母雙雜交（Y2H）技術進行點對點驗證，最終發現1組存在強相互作用，1組存在較弱的相互作用（圖4）。

圖3 差異蛋白的PPI分析

圖4 酵母雙雜交（Y2H）驗證蛋白互作

研究小結
在該研究中，首先通過表型實驗發現暴露于滲透壓-寒冷脅迫24小時的小麥幼苗顯示出抑制生長，以及增加的脂質過氧化，相對電解質滲漏等表型變化。隨后采用基于iTRAQ的定量蛋白質組方法確定暴露于滲透壓-寒冷脅迫條件下的小麥幼苗的根和葉的蛋白質組學特征，在根與葉中共鑒定出250個和258個差異表達蛋白質，并且這些蛋白質中的大多數顯示出不同的豐度，從而揭示了器官特異性的差異。接著采用PPI互作分析闡釋差異表達蛋白參與的互作調控網絡，揭示蛋白互作網絡在脅迫條件下的變化。最后從PPI分析中選出5對互作蛋白進行驗證，確認脅迫造成的蛋白互作變化。

上一條：蛋白質表達、分離、純化步驟詳解

下一條：蛋白質組學技術在肝損傷生物靶標技術的應用

4480YY私人影院免费无码,九九热视频这里只有精品,亚洲无线乱码高清在线观看一区

蛋白質組學-酵母雙雜交技術聯合研究蛋白互作變化