綠色熒光蛋白（GFP）是來自維多利亞多管發光水母 Aequorea victoria的一個小分子量蛋白質。它是由Osamu Shimomura發現的，當被藍色到紫外區的光刺激時發出綠色熒光。相關熒光蛋白在許多其它海洋生物中發現，例如珊瑚，海葵和海紫羅蘭。GFP非常適合用于蛋白質標記，這是它取得空前成功的最大原因之一。雖然它非常適合實時成像，但是在使用方法中如果導致GFP熒光淬滅，那么就有必要使用抗GFP抗體。組織樣品，組織學制劑和使用固定劑的冷凍保存，通常導致GFP熒光完全或部分損失，則需要使用GFP抗體來獲得可靠的實驗結果。通過免疫印跡檢測GFP標簽蛋白，免疫沉淀檢測蛋白質-蛋白質相互作用，這些實驗也必須使用GFP抗體。GFP抗體有多克隆或單克隆抗體，適用于蛋白質印跡，免疫沉淀，免疫組化，免疫細胞化學定位和免疫吸附測定（ELISA），以檢測GFP，GFP變體和GFP融合蛋白。

 

        GFP抗體使用量在增長，相應供應商的數量也在增加,有些供應商還提供GFP單結構域抗體或納米抗體。這些抗體包括一個單一可變抗體結構域，這是一種駱駝來源的單結構域抗體。這些抗體比常規抗體小得多，而且有重要的用途。 Caussinus E等人已經率先發明deGradFP方法，該方法利用遺傳編碼方式，具體為在任何真核系統中，快速消耗GFP標簽蛋白。此系統依賴于GFP單結構域抗體片段（vhhGFP4）融合到F-box結構域。此融合蛋白結合GFP并直接介導蛋白酶體降解。當GFP標記的蛋白是功能蛋白的唯一來源，那么基因功能的分析就不受殘留蛋白的干擾。Ries等人使用GFP標簽蛋白和分子量小、親和力高的單結構域GFP抗體，在微管，神經元和酵母細胞研究中獲得納米級的分辨率。

 

關于GFP抗體的常見問題

 

我應該購買哪些供應商的GFP抗體？

        GFP抗體的使用方法是決定供應商的一個重要因素。供應商列出抗體最合適的使用方法，并且給出建議的稀釋度。然而，抗體性能可能與系統和實驗條件有關。許多供應商提供客戶支持服務，這可以就他們公司抗體是否適合您的實驗來給出建議。

 

GFP抗體也是別GFP變體嗎？

        GFP抗體識別維多利亞多管發光水母（Aequorea victoria）GFP蛋白的其它變體。

 

為什么免疫印跡實驗中GFP抗體無信號？

        免疫印跡實驗中的信號缺失可能存在多種問題。轉膜失敗和轉膜效率極差都導致無信號。轉膜效率可以通過麗春-S染色進行檢測。氣泡的存在也會導致轉膜效率差。GFP標記蛋白的表達水平可能太低，提高上樣體積，并包含陽性對照。抗體濃度非常稀也可能是個問題，多試幾個不同濃度的抗體來檢測免疫印跡。此外，一個極小的可能性是，GFP標簽沒有同步表達和不表達也可導致信號缺失。

 

GFP信號太弱無法成像，是否可以增強信號？

        在某些實驗條件下，GFP熒光會部分或完全丟失。因此，表達GFP標記蛋白的一些細胞結構可能難以顯現或成像。GFP-Booster是駱駝來源的VHH結構域結合蛋白耦合了強信號熒光染料，能穩定并增強熒光信號。