• 雙熒光素酶檢測(cè)是轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究中十分重要的實(shí)驗(yàn)手段，主要應(yīng)用于啟動(dòng)子和轉(zhuǎn)錄因子，以及miRNA和其靶基因互作的驗(yàn)證。

• 在雙熒光素酶檢測(cè)中，將螢火蟲(chóng)熒光素酶作為實(shí)驗(yàn)報(bào)告基因，海腎熒光素酶作為對(duì)照?qǐng)?bào)告基因。實(shí)驗(yàn)報(bào)告基因用于測(cè)試實(shí)驗(yàn)條件下基因的表達(dá)，而對(duì)照?qǐng)?bào)告基因作為內(nèi)對(duì)照。

• 以熒光素為底物來(lái)檢測(cè)螢火蟲(chóng)熒光素酶活性，熒光素酶可以催化熒光素，在熒光素氧化的過(guò)程中會(huì)發(fā)出生物熒光，然后通過(guò)化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定。

microRNA靶基因包括mRNA、lncRNA、circRNA。對(duì)于microRNA表達(dá)量較高的細(xì)胞，可以同時(shí)構(gòu)建microRNA的inhibitor進(jìn)行驗(yàn)證。

雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)的其他應(yīng)用：

• 啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)分析：將待測(cè)啟動(dòng)子區(qū)域序列進(jìn)行分段截短，或?qū)μ囟ㄎ稽c(diǎn)進(jìn)行突變，再分別插入報(bào)告基因上游，檢測(cè)其啟動(dòng)子的活性。

• 啟動(dòng)子SNP分析：一些基因的啟動(dòng)子區(qū)域存在單核苷酸多態(tài)性，將待測(cè)啟動(dòng)子插入報(bào)告基因上游，檢測(cè)熒光素酶活性，從而判斷這些啟動(dòng)子的相對(duì)活性。