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一起科研走花路,探索你不知道的酵母雜交篩選小技巧

信息來源:金開瑞 作者:genecreate 發布時間:2022-01-20 21:17:56

一起科研走花路,探索你不知道的酵母雜交篩選小技巧。酵母雜交的篩選可以簡單理解為一場浩瀚的自由戀愛相親大會。一個蛋白可以與很多很多蛋白發生相互作用,在不同的時間場所,最終會有一些強烈心儀的對象。那滿足酵母雜交篩選的條件就可以簡單設想為提高這場相親成功概率所做的準備,簡單概括為以下幾點:
 

一、 參與的男女嘉賓必須衣冠整齊,活力四射,雙方到底是要見面的,最明顯的就是會先打扮一下自己。那么酵母的相親也不例外,優質的文庫可供選擇,誘餌的轉化效率以及活力都要保持在一個較高的水平,茫茫蛋白,一眼望去-yeah excellent men!

 

二、 沉默就是破銅爛鐵,陌生人第一次見面,想要相親成功,溝通極其重要。如果不制造共同話題那必然是黯然退場。同理那酵母的相親也一樣,要么提高共轉效率,要么控制好誘餌和文庫的比例,增加相互碰撞的幾率,速率不能過快,要給兩個蛋白充分的時間結合產生相互作用,這樣才能提高來電概率。

 

三、 感情除了有一見鐘情,還有日久生情。所以雜交的篩選時間上也會有不同,可以根據具體誘餌具體控制分析,作用強弱可根據信號強弱進行判斷,畢竟與誘餌匹配的另一半適合的有很多,信號最強的就是能使之怦然心動的另一位。

 

言歸正傳,文庫構建篩選的流程通常如下所示:

 

圖片
 

1.   核酵母文庫構建篩選實驗流程

 
 

 

建庫

 

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雙雜篩選

 

 

01

 

matting方式

 

圖片

 

 

02

 

共轉

 

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單雜篩選

 

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2.   膜酵母文庫構建篩選實驗流程

 
 

 

建庫

 

圖片

 

共轉

 

圖片

 

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