DNA pull down 技術(shù)是體外研究DNA與蛋白質(zhì)互作的有力工具。該技術(shù)針對(duì)目標(biāo)區(qū)域設(shè)計(jì)特異性DNA探針并經(jīng)過脫硫生物素標(biāo)記,標(biāo)記后探針可以和偶聯(lián)在磁珠上的鏈霉親和素親和結(jié)合,再與總蛋白提取物進(jìn)行孵育，有互作的蛋白質(zhì)可以和DNA探針特異性結(jié)合,形成磁珠-DNA探針-蛋白復(fù)合物,洗滌去除非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì),再經(jīng)過洗脫得到目的DNA探針-蛋白質(zhì)復(fù)合物,最后通過Western Blot或質(zhì)譜(MS)鑒定蛋白質(zhì)類型。其原理圖如1.1:

Q:通過pull-down后銀染驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，沒有想要的目的條帶?

1)有可能是樣品被蛋白酶降解，對(duì)應(yīng)的策略是需要添加蛋白酶抑制劑，所有操作保持 4℃以下冰上操作并防止凍融；

2)有可能是加入生物素標(biāo)記DNA量不足，可以增加生物素標(biāo)記DNA量；

3)裂解液鹽堿度太高，需用低鹽堿度的裂解液；

4)加入細(xì)胞裂解液不夠，可以增加細(xì)胞裂解量。

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