實驗原理
本產(chǎn)品是一款高效、快捷的cDNA一鏈合成預(yù)混液,包含所有一鏈cDNA合成反應(yīng)所需組分(GeneCreate Revertase及其反應(yīng)Buffer、RNA酶抑制劑、dNTPs, Oligo(dT)20VN和隨機引物等),反應(yīng)中僅需加入RNA模板和水。 預(yù)混液中的GeneCreate Revertase是基于M-MLV開發(fā)的更高效逆轉(zhuǎn)錄酶,降低了RNase H活性,提高了熱穩(wěn)定性,反應(yīng)溫度高達55°C,大幅提升了逆轉(zhuǎn)錄效率和對復(fù)雜模板(大量二級結(jié)構(gòu)或高GC比例)的耐受性,具有更高的特異性。
通過 Realtime PCR進行基因表達分析時,cDNA 的檢測非常重要。但是用過柱純化式的RNA抽提試劑盒純化的Total RNA中經(jīng)常會混入微量的gDNA。而當(dāng)檢測目的基因中存在假基因或無法在橫跨內(nèi)含子的位置上設(shè)計引物時,混入的gDNA會被當(dāng)作模板擴增,影響準(zhǔn)確的定量。
本產(chǎn)品中GeneCreate dsDNase,可徹底去除RNA模板中殘留的基因組DNA,使定量結(jié)果更加準(zhǔn)確;同時其具有熱敏感性,可在高溫條件下快速不可逆地失活。因此僅需一次加樣,即可同管進行去除基因DNA 污染與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。