細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)
- 細(xì)跑增殖/調(diào)亡/周期/衰老檢測
- 細(xì)胞遷移及侵襲
- 活性氧檢測
- PKH26染色
服務(wù)特色
金開瑞的細(xì)胞學(xué)技術(shù)團(tuán)隊(duì)常年從事蛋白生物活性分析等方面檢查和研究，具備豐富的經(jīng)驗(yàn)。自有的數(shù)十種庫存細(xì)胞可以滿足多數(shù)常見腫瘤細(xì)胞分析應(yīng)用需要。擁有武漢生物技術(shù)研究院儀器共享平臺(tái)，配備Beckman Moflo XDP超速流式細(xì)胞系統(tǒng)等國際領(lǐng)先水平的儀器設(shè)備。
服務(wù)介紹
細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)是一種用于研究生物分子、細(xì)胞和組織在生理和病理狀態(tài)下的功能的實(shí)驗(yàn)方法。這些實(shí)驗(yàn)可以揭示分子機(jī)制、代謝途徑、細(xì)胞信號(hào)通路等方面的信息。常見的細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)包括細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、侵襲、分化、分泌、內(nèi)吞作用等。這些實(shí)驗(yàn)通過對細(xì)胞的操作、觀察和測量，可以深入了解分子與細(xì)胞的生理與病理狀態(tài)，為研究生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥物研發(fā)等領(lǐng)域提供有力的支持。
常見問題
Annexin V可特異性結(jié)合于凋亡細(xì)胞膜外翻的磷脂酰絲氨酸，PI只能穿透晚期/死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜對核著色，使用Annexin V/PI雙染可以將未凋亡、早期凋亡、晚期凋亡的細(xì)胞群體比例顯示出來，數(shù)據(jù)通過流式細(xì)胞術(shù)或熒光顯微鏡獲得。
DNA染料碘化丙啶PI（Propidium Iodide，PI）可以嵌入到DNA雙螺旋堿基之間并與之結(jié)合，結(jié)合量與DNA的含量成正比，而PI的量是與熒光強(qiáng)度是成正比的，后者可以通過直方圖中的通道數(shù)反應(yīng)出來。 該實(shí)驗(yàn)用于腫瘤病理學(xué)中判斷腫瘤的增殖狀態(tài)和倍體分析；用于分析藥物對細(xì)胞增殖的影響。
每一份獨(dú)立樣品的最低需要量，動(dòng)物細(xì)胞＞2x10^7，動(dòng)物組織＞400mg，植物組織＞2g。請盡量提供更多樣品，便于我方進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)、提高成功率。 細(xì)胞可以提供培養(yǎng)瓶或凍存細(xì)胞，由我方驗(yàn)收后培養(yǎng)（或復(fù)蘇）；也可以收取足量細(xì)胞后速凍、-80保存至寄送。 動(dòng)植物組織樣品需在離體后盡快液氮速凍、-80保存至寄送。植物組織盡量選取幼嫩新鮮部分。 樣品寄送須使用足量干冰。
細(xì)胞增殖相關(guān)實(shí)驗(yàn)包括有MTT/CCK8、EdU摻入、（軟瓊脂）克隆形成和細(xì)胞周期檢測。 MTT/CCK8：一般在基因表達(dá)水平干預(yù)、細(xì)胞因子或藥物干預(yù)等條件下，培養(yǎng)細(xì)胞后加入MTT/CCK8，反應(yīng)的是細(xì)胞總體代謝活力水平，通過多孔板光度計(jì)（酶標(biāo)儀）獲取數(shù)值，可繪制細(xì)胞的生長曲線。 EdU摻入：在細(xì)胞培養(yǎng)過程中EdU，通過DNA合成水平，反應(yīng)細(xì)胞增殖狀態(tài)及比例，后續(xù)通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀獲取數(shù)據(jù)。 （軟瓊脂）克隆形成：不同干預(yù)處理的細(xì)胞，在培養(yǎng)孔板中或鋪有低熔點(diǎn)瓊脂糖的培養(yǎng)孔板中，培養(yǎng)2周左右觀察其形成單克隆的能力。軟瓊脂克隆形成主要用于懸浮細(xì)胞，或者在研究貼壁細(xì)胞的抗失巢凋亡（anoikis）能力時(shí)。 細(xì)胞周期：實(shí)驗(yàn)細(xì)胞經(jīng)過PI染色后，進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析，可以獲得細(xì)胞在各個(gè)細(xì)胞周期（G1/G2/M）的分布比例。
Transwell小室上下層由聚碳酸酯膜分隔，膜上有3-8μm不同規(guī)格孔徑的小孔。不鋪Matrigel膠時(shí)細(xì)胞的穿膜過程體現(xiàn)其遷移能力；當(dāng)鋪有Matrigel膠時(shí)細(xì)胞穿膜需分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）等基質(zhì)水解酶類，此時(shí)體現(xiàn)的是細(xì)胞的侵襲能力。所得數(shù)據(jù)為顯微鏡下拍照及細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果。
