服務介紹
定點突變是指在DNA分子的特定位置上發生的單個堿基的變化，通常指有意識地通過基因工程方法改變DNA序列的某一位點，從而產生特定的基因型和表型變化。這種技術在生命科學研究、醫學治療和農業生產等領域都有著廣泛的應用。通過定點突變技術，可以產生具有特定性狀或功能的基因型，如疾病模型、抗病性、耐鹽堿性等。定點突變技術的出現為生命科學領域提供了一種精準而高效的基因工程方法，可以為研究人員提供更多的實驗手段和研究工具。
服務優勢
- 序列準確性：高性能GS聚合酶可確保突變體的準確性，避免產生不需要的突變。
- 任意位點：使用我們先進的基因合成和突變技術，金開瑞可在任何位點引入突變。
- 較長DNA上進行突變：經過技術優化提升，可在長達12 kb的DNA（包括目標基因及其載體）上引入點突變、插入突變和缺失突變。
- 一站式解決方案：我們提供全面的上下游服務，包括模板DNA測序、基因合成、快速克隆到自由表達載體、定制載體構建以及蛋白質表達和純化。
服務流程
客戶提供
1.客戶提供模板突變前基因序列，及突變后基因序列，并標注突變位置；
2.目的序列需要插入的載體信息，包括序列，抗性，測序引物，克隆位點；
3.樣品：
1）包含目的序列的模板質粒，模板質粒的抗性；
2）目的載體（金開瑞無法提供載體情況下）；
4.模板質粒中包含目的基因序列這段的峰圖格式測序報告（并非整個模板質粒的測序報告）。
最終交付
- 約4 μg含有目的片段的高純度凍干質粒DNA；
- 含有重組質粒的穿刺菌或甘油菌一管（默認菌株為TOP10具體以樣品管壁標簽為準。）；
- 發貨文件主要包括如下內容：測序結果、COA報告、sqd文件、seq文件。
服務說明
| 服務名稱 | 服務周期（工作日) | 備注 |
| 基因長度<1500bp | 5-8 | 模板序列有難度需要另外評估 |
| 1500bp≤基因長度<3000bp | 8-13 | 模板序列有難度需要另外評估 |
| 3000bp≤基因長度 | 請咨詢 | 模板序列有難度需要另外評估 |
相關資源
1、怎么優化定點突變實驗條件，例如反應溫度、引物濃度、聚合酶的選擇等
①反應溫度優化：
● 溫度梯度法：在一定溫度范圍內設置多個反應管，每個管中溫度略有不同，進行反應并比較擴增效果。根據結果確定最適合的溫度。
● 溫度逐步優化法：逐步調整反應溫度，開始時選擇一個常用的溫度，根據結果逐漸提高或降低溫度，找到最優溫度。
②引物濃度優化：
● 引物濃度梯度法：在一定濃度范圍內設置多個反應管，每個管中引物濃度略有不同，進行反應并比較擴增效果。根據結果確定最適合的引物濃度。
● 引物濃度逐步優化法：逐步調整引物濃度，開始時選擇一個常用的濃度，根據結果逐漸增加或減少引物濃度，找到最優濃度。
③聚合酶的選擇和濃度優化：
● 聚合酶比較實驗：同時使用不同聚合酶進行反應，比較擴增效果和特異性。根據結果選擇最適合的聚合酶。
● 聚合酶濃度優化：在一定濃度范圍內設置多個反應管，每個管中聚合酶濃度略有不同，進行反應并比較擴增效果。根據結果確定最適合的聚合酶濃度。
④反應時間優化：
● 反應時間梯度法：在一定時間范圍內設置多個反應管，每個管中反應時間略有不同，進行反應并比較擴增效果。根據結果確定最適合的反應時間。
● 反應時間逐步優化法：逐步調整反應時間，開始時選擇一個常用的時間，根據結果逐漸增加或減少反應時間，找到最優時間。
2、怎么防止偶發突變，提高定點突變實驗的特異性和準確性
● 引物設計優化：確保引物的設計準確和特異性，避免引物之間的相互作用或自身的二級結構形成。選擇合適的引物長度和序列，使用專業的引物設計工具進行引物設計，如Primer3、IDT OligoAnalyzer等，以提高引物的特異性和效率。
● 引物和模板的純化：使用純度高的引物和模板可以減少非特異性擴增和偶發突變的發生。使用純化試劑盒或純化方法對引物和模板進行純化，去除雜質和不特異的序列，提高突變實驗的可靠性。
● 聚合酶的選擇：選擇高保真度的聚合酶，具有較低的錯誤率和較好的擴增能力。高保真度的聚合酶可以降低錯誤率，減少偶發突變的可能性。
● 優化反應條件：調整反應條件可以減少偶發突變的發生。優化反應溫度、引物濃度、聚合酶的選擇和濃度、反應時間等參數，以提高反應的特異性和效率。通過嘗試不同的溫度梯度、引物濃度梯度和聚合酶濃度梯度等，找到最適合的反應條件。
● 實驗驗證和重復：進行實驗驗證和重復是防止偶發突變的重要步驟。使用陰性對照組和陽性對照組驗證突變位點的正確性和特異性。重復實驗可以評估實驗的穩定性和可重復性，排除偶發突變的影響。
● 嚴格的實驗操作：遵循實驗室的操作規范和流程，保持實驗室的清潔和衛生，避免污染和誤操作的發生。使用新鮮的試劑和消耗品，避免交叉污染。
● 數據分析和解釋：對實驗結果進行準確的數據分析和解釋，確認突變位點的正確性和特異性。使用合適的測序方法進行突變位點的鑒定和驗證，結合基因組瀏覽器等工具進行數據分析和解讀。
3、如何檢測定點突變效率？
|
檢測方法 |
特點 |
限制 |
適用場景 |
| 測序分析 |
直接獲取突變位點的序列信息， 能確定具體的堿基改變 |
需要進行測序，可能存在測序誤差， 無法檢測大規模突變 |
定點突變鑒定、序列驗證、突變頻率分析 |
| 限制性內切酶切割 |
利用酶切產物的大小和模式來判斷突變是否發生， 直觀觀察突變效果 |
僅適用于改變限制性內切酶切割位點的突變， 其他類型的突變不適用 |
突變位點酶切驗證、突變篩選 |
| PCR分析 |
通過擴增突變片段進行檢測， 可進行大規模突變篩選 |
PCR擴增過程中可能存在非特異性擴增、 擴增效率差異等問題， 需優化引物和反應條件 |
大規模突變篩選、突變頻率分析、突變鑒定 |
| 克隆和測序 |
通過克隆突變片段到載體并測序， 獲得多個克隆子的突變信息 |
需要進行克隆和測序步驟，相對耗時和費力 | 克隆突變驗證、多克隆體突變分析、突變效率評估 |
| 功能性分析 |
通過評估突變對蛋白質功能或 生物學活性的影響來判斷突變效果 |
針對具體功能進行分析， 可能需要進一步實驗或檢測手段 |
突變功能評估、蛋白質功能解析、功能位點鑒定 |
這些方法在定點突變實驗中各具特點和適用場景，可以根據實驗的目的和需求選擇合適的檢測方法。同時，綜合使用多種方法可以提高突變效率的準確性和可靠性，并進一步解析突變對蛋白質功能或生物學活性的影響。
