小金博士本月的直播來咯！

新一期的直播主題是“基因合成之連接轉化”
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直播時間為4月27日（周四）19：00

  實驗簡介  

主題：基因合成之連接轉化

    全基因合成是指在體外利用人工方法合成雙鏈DNA分子的技術。基因合成無需模板，是獲取基因的重要手段之一。目前該技術主要應用在克隆一些不易獲取模板的基因、自然界不存在的新基因以及異源基因表達上，經常在對基因密碼子優化后進行。簡而言之就是將不同來源、具有不同功能的DNA序列組裝在一起，以達到預設的目的。

    在這期間需要用到一系列的工具，包括試劑盒、緩沖液、酶等等，其中酶起決定性作用。

    一般包括擴增獲取目的基因、載體處理、連接、轉化。

    基因合成離不開質粒載體。質粒載體是指游離在宿主染色體DNA之外的環狀、能夠自主復制的DNA分子；絕大多數的策略需要將質粒載體線性化處理，以暴露其中能夠與目的基因進行組裝的部分。

    線性化的常用手段有酶切、PCR。

線性化載體的制備有兩種：

    第一種是使用內切酶對克隆載體進行酶切，此方法的優點是載體的突變率較低，高保真，但缺點是酶切不完全會使假陽性克隆空載體的出現影響單克隆的鑒定。

    第二種是反向PCR擴增制備線性化克隆載體，再采用膠回收或者Dpn I消化以去除環狀載體質粒模板的影響，此方法的優點是假陽性克隆較少，但缺點是因PCR擴增的條帶較長，突變的概率也會相應增加。

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  直播預告  

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