一、酵母單雜交
酵母單雜交技術是在酵母雙雜基礎上發展而來的一種研究核酸-蛋白相互作用的工具，被廣泛用于研究真核細胞內基因的表達調控，如鑒別DNA結合位點發現潛在的結合蛋白基因、分析DNA結合結構域信息等。

 
二、核蛋白酵母雙雜交
核蛋白酵母雙雜交技術最初由Fields等人在研究酵母轉錄因子GAL4性質時建立，后續經過不斷改進已發展成為一種成熟的蛋白-蛋白互作研究工具，具有簡便、靈敏、可反映蛋白在活細胞內互作真實情況的特點，被廣泛應用于互作蛋白的篩選、蛋白相互作用的鑒定/驗證、蛋白互作機理的探究、蛋白連鎖圖譜繪制等工作。

 
A為誘餌，B為獵物。
篩選涉及到的報告基因：
（1）HIS3。
（2）ADE2。
（3）MEL1。
誘餌質粒PGBKT7攜帶trp基因, ， 獵物質粒PGADT7攜帶Leu基因。
篩選涉及到的平板：DDO[SD/-Leu/-Trp]，DDO/X[SD/-Leu/-Trp/X-α-gal]，TDO /X [SD/-Leu/-Trp/HIS3/X-α-gal]，QDO /X[SD/-Leu/-Trp/HIS3/Ade2/X-α-gal]
 
1、誘餌自激活驗證

 
分析：誘餌質粒重組質粒PGBKT7-A和獵物空載PGADT7共轉化Y2Hgold酵母菌株。（1）涂布DDO平板能夠生長，說明誘餌PGBKT7-A+ PGADT7已成功轉入宿主菌中且對宿主菌無毒性；（2）涂布TDO平板，不能生長，說明誘餌PGBKT7-A+ PGADT7無自激活現象，不能激活宿主菌報告基因his的表達；（3）涂布QDO平板沒長，說明誘餌PGBKT7-A+ PGADT7無自激活現象，沒有激活報告基因ADE2。
 
2、共轉驗證——陰陽性對照
 
3、共轉驗證——實驗組
 
 
分析：誘餌重組質粒PGBKT7-A和獵物重組PGADT7-B共轉化Y2Hgold酵母菌株。（1）涂布DDO平板能夠生長，說明誘餌PGBKT7-A+ PGADT7-B已成功轉入宿主菌中且對宿主菌無毒性；（2）涂布TDO平板能生長，說明誘餌PGBKT7-A+ PGADT7-B能夠互作，激活了宿主菌報告基因HIS3的表達；（3）涂布QDO平板能長，說明誘餌PGBKT7-A+ PGADT7-B能夠互作，同時激活了報告基因HIS3和ADE2的表達。
 
4、雙雜點種圖
 

 
1自激活: Y2H[PGBKT7-A+ PGADT7]
2實驗組: Y2H[PGBKT7-A+ PGADT7-B]
3陽性對照: Y2H[pGBKT7-53+pGADT7-T]
4陰性對照: Y2H[pGBKT7-lam+pGADT7-T]
 
5、酵母單雜點對點驗證示意圖
 
P為誘餌啟動子，B為獵物。
單雜篩選報告和抗性基因：
AbAr/ AUR-C，AUR1基因的一個顯性突變版本，編碼肌醇磷酸化神經酰胺syn- thase酶。AUR1-C在Y2HGold/ Y1HGold酵母株中表達，是由于蛋白質與蛋白質的相互作用，使GAL4轉錄激活和DNA結合域接近?？梢蕴砑覣BA進行背景抑制。,
誘餌質粒PABAI攜帶Ura基因，獵物質粒PGADT7攜帶Leu基因。
篩選所用到的平板：SD/- Leu，SD/- Leu/+AbA

 
 
自激活結果分析：PGADT7空載轉化含誘餌啟動子PAbAi-PY1Hgold酵母菌株。
（1）涂布SD/-Leu平板能夠生長，說明誘餌PAbAi-P已成功轉入宿主菌中且對宿主菌無毒性；
（2）涂布SD/-Leu/AbA(100ng/ml)， SD/-Leu/AbA(200ng/ml) 平板能生長，說明200ng/ml的AbA不能抑制報告基因AbAr/ AUR-C ；
（3）涂布SD/-Leu/AbA(500ng/ml) ，SD/-Leu/AbA(800ng/ml)，SD/-Leu/AbA(1000ng/ml)平板沒長，說明能夠抑制報告基因AUR1-C的最低AbA濃度為500ng/ml，后續可用AbA(500ng/ml)進行共轉驗證。如果AbA最高抑制濃度1000ng/ml仍然能夠生長，則只能考慮截短誘餌啟動子。
 
6、共轉驗證——陰陽性對照
 
 
7、共轉驗證——實驗組
 
 
分析：誘餌啟動子重組質粒PAbAi-P轉化Y1Hgold酵母菌株涂布SD/-Ura平板，挑取單克隆菌制備成感受態，將獵物重組質粒PGADT7-B轉化到Y1Hgold【 PAbAi-P 】中。（1）涂布SD/- Leu平板能夠生長，說明獵物重組質粒PGADT7-B已成功轉入宿主菌中且對宿主菌無毒性；（2）涂布SD/- Leu /+AbA (500ng/ml)平板能生長，說明誘餌PAbAi-P + PGADT7-B能夠互作，激活了宿主菌報告基因AbAr/ AUR-C的表達。
 
8、單雜稀釋點種圖
 
 
1. 轉化效率高，較少假陰性；
2. 設置嚴格的對照實驗，排除假陽性和假陰性；
3. 酵母雙雜系統采用多個報告基因，且每個報告基因上游調控區各不相同，可大幅度減少假陽性；
4. 報告基因整合到染色體上，使基因表達水平穩定，消除了由于質?？截悢底兓鸹虮磉_水平波動而造成的假陽性；
5. 嚴格設置點種驗證實驗菌體生長狀態，進一步驗證是否互作及互作強弱；
6. 嚴格保存原始實驗數據便于溯源。