服務(wù)介紹
噬菌體展示技術(shù)通過將外源肽段和噬菌體衣殼蛋白融合展示于噬菌體表面，進(jìn)行高通量篩選及富集，并對所需功能的克隆進(jìn)行定性分析，該技術(shù)展示對象涵蓋抗體、抗體 片段、肽段、cDNA等。在對抗體庫的研究中，噬菌體展示技術(shù)可對人和其他動物的B細(xì)胞抗體庫進(jìn)行體外建庫篩選，避開了免疫和細(xì)胞融合等步驟從而縮短實(shí)驗(yàn)周期并增加了穩(wěn)定性，該技術(shù)還具有篩選容量大、可發(fā)酵大量主產(chǎn)、方法簡單等優(yōu)點(diǎn)。
M13 Bacteriophage Antibody (HRP) ：是一種針對M13噬菌體的特異性抗體，在噬菌體展示技術(shù)的篩選過程中，M13噬菌體抗體（HRP）可用于ELISA檢測，以識別和結(jié)合特定的噬菌體克隆，從而幫助我們篩選出具有所需特性的噬菌體。
服務(wù)優(yōu)勢
- 多種成品噬菌體庫可供使用；
- 固相和液相噬菌體展示文庫篩選經(jīng)驗(yàn)豐富，可自動化進(jìn)行噬菌體展示高通量篩選，實(shí)現(xiàn)快速交付；
- 引入先進(jìn)的親和力檢測技術(shù)，深入的生物信息學(xué)分析，選擇最佳的人源框架區(qū)序列快速且高通量篩選高親和力及高產(chǎn)量的人源化抗體；
- 片段插入率高。
最終交付
- 挑取單克隆進(jìn)行ELISA?panning篩選檢測，以高于空白及陰性對照2.2倍為陽性克隆的判斷標(biāo)準(zhǔn)安排測序：
- 1、在陽性克隆序列都不同的情況下，對不同陽性克隆進(jìn)行diluted?ELISA，至少設(shè)置3個梯度，至少交付3個ELISA最好的克隆，收費(fèi)100%；
- 2、若結(jié)果不理想，換用不同panning條件再做一次3-4輪的淘選，并繼續(xù)挑單克隆測試是否有新克隆或更高親和力的克隆出現(xiàn)。若有新克隆出現(xiàn)，繼續(xù)往下做，并按照上述標(biāo)準(zhǔn)收費(fèi)，若無新克隆出現(xiàn)，考慮是自身項(xiàng)目的問題，該步驟收費(fèi)50%。
服務(wù)說明
成品庫
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序號 |
庫類別 | 種屬 | 天然庫或其他 | 抗體基因來源 | 標(biāo)簽 | 庫容 |
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1 |
ScFv | 人 | 天然庫 | 外周血 | E-tag/His-tag/HA | ≥7次方 |
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2 |
鼠 | |||||
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3 |
sdAb | 羊駝 | 天然庫 | ≥9次方 | ||
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4 |
半合成庫 | |||||
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5 |
7肽隨機(jī)庫 | \ | 隨機(jī)肽庫 | \ | \ | ≥9次方 |
| 6 | 12肽隨機(jī)庫 | \ | \ | \ | ≥9次方 |
注：成品庫僅提供使用，不對外出售
案例展示
常見問題與解析 (Q&A)
1）TG1宿主菌：用于被噬菌體感染后擴(kuò)增（特征：抗體序列和噬菌體的P3蛋白通過TAG偶聯(lián)，TG1菌的特點(diǎn)是對TAG既可以識別為終止子，即只表達(dá)出抗體，分泌上清中，也可識別為TAG編碼的aa，翻譯成Q（谷氨酰胺），此時抗體序列即和噬菌體P3相連，展示在噬菌體表面，所以此時上清是一個混合物，通常用于篩選）； 2）抗體庫：有兩種形式，一是TG1菌（內(nèi)含展示抗體的phagemid），下一步如果要做篩選需添加輔助噬菌體，使phagemid包裝到噬菌體上，使之成為含有抗體序列的噬菌體庫，用于篩選；二是已包裝完成的噬菌體庫（含有展示抗體的phagemid），下一步做篩選，其實(shí)二就是已經(jīng)做完一的步驟； 3）輔助噬菌體：構(gòu)建好的小鼠天然抗體庫通常以噬菌粒的形式保存在宿主菌中，在淘選過程開始前，應(yīng)當(dāng)先拯救文庫，使其成為噬菌體展示的抗體庫輔助噬菌體，過程即添加輔助噬菌體，起作用是編碼產(chǎn)生另一些噬菌體所不能產(chǎn)生的重要蛋白質(zhì)，使另一些噬菌體得以生長和繁殖； 4）HB2151表達(dá)菌（特征：對ATG只能識別為終止子，是抗體單獨(dú)分泌到上清中，主要用于表達(dá)?。? 備注：TG1和HB2151的差別是，TG1是終止密碼抑制菌株，終止密碼可以通讀，HB2151就不行了，也就是說TG1可以表達(dá)scfv抗體-P3蛋白，而HB2151可以只表達(dá)出scfv抗體。
對于噬菌體抗體庫做篩選的話： 1.優(yōu)勢：抗體庫技術(shù)不僅可以模擬動物免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體的過程，還具有許多獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，令雜交瘤技術(shù)難以相比。抗體庫技術(shù)無需免疫，從理論上講，108-1010的庫容就可能包容所有的抗體。利用抗原即可直接從非免疫動物抗體庫中篩選出特異性抗體，然后將陽性克隆重組到質(zhì)粒表達(dá)載體，通過大腸桿菌或者真核細(xì)胞直接表達(dá)有功能的抗體分子，周期較短，通常16-20周即可完成一個天然抗體庫的構(gòu)建及篩選工作； 2.劣勢：scfv抗體親和力相對傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)獲取的全抗體偏低或者相當(dāng)，但如果不影響內(nèi)源樣本或者二三級結(jié)構(gòu)的識別，該劣勢點(diǎn)即可彌補(bǔ)！ 傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)做篩選的話： 1.優(yōu)勢：通過多次免疫使動物體內(nèi)產(chǎn)生的抗體達(dá)到親和力成熟后，取動物的B淋巴細(xì)胞進(jìn)行融合，經(jīng)過多次亞克隆篩選獲得可穩(wěn)定分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞株，并能持續(xù)培養(yǎng)獲得抗體，該種方法獲得的抗體相對噬菌體抗體庫篩選的單鏈抗體來說屬于天然全抗體，抗體親和力更高，可應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)類型也更為廣泛，其次批間差較??； 2.劣勢：周期較長，一般從抗原制備開始到獲得單鏈抗體，需要至少5個月的時間。
我們合作的噬菌體庫篩選項(xiàng)目一般是這么個流程，客戶拿到上清，會初步做下結(jié)合活性和部分功能驗(yàn)證，可用的測序拿到序列，然后批量構(gòu)建，批量表達(dá)，篩選出高表達(dá)高親和力的，再進(jìn)一步測試是否有比如成藥靶點(diǎn)潛力等實(shí)驗(yàn)。我們表達(dá)了這么多抗體項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)來看，還是要用哺乳系統(tǒng)。因?yàn)榇竽c系統(tǒng)很難實(shí)現(xiàn)上清表達(dá)，大多是包涵體，而抗體要想有功能，必須還是上清表達(dá)，借助哺乳系統(tǒng)，加上可分泌到上清中的信號肽，而抗體效價跟抗體純度跟濃度肯定是分不開的
噬菌體的滴度很高，從之前的陽性測試就能看得出來，即便再稀釋個10倍甚至100倍，都還會有2.0的讀值，有少量非特異性吸附是很正常的，不然淘選階段都結(jié)合上的噬菌體為什么ELISA篩選后，只有少量的克隆才能被挑選出來，測試交叉這種，是需要在合適濃度的抗原抗體反應(yīng)體系下進(jìn)行的，尤其是間接ELISA，不管是抗原還是抗體，濃度過高，少量的非特異性結(jié)合更常見。
相關(guān)技術(shù)服務(wù)
●? 蛋白表達(dá) ●? 基因合成 ●? 單克隆抗體定制 ●? 多克隆抗體定制 ●? 科研/診斷ELISA試劑盒開發(fā) ●? 科研/診斷膠體金檢測試紙條開發(fā)
相關(guān)資源
1、噬菌體展示技術(shù)的步驟
噬菌體展示技術(shù)的步驟主要包括以下幾個階段：
①構(gòu)建噬菌體展示文庫：
● 獲取目標(biāo)蛋白或多肽的編碼序列。
● 選擇適合的噬菌體展示系統(tǒng)，常用的包括M13噬菌體、T4噬菌體等。
● 將目標(biāo)序列與噬菌體基因組中的外被蛋白基因（coat protein gene）連接，構(gòu)建融合基因。
● 將融合基因插入噬菌體基因組中，構(gòu)建噬菌體展示文庫。
②噬菌體展示：
● 將構(gòu)建好的噬菌體展示文庫感染到宿主細(xì)菌中，如大腸桿菌。
● 細(xì)菌表達(dá)噬菌體展示文庫中的融合基因，使噬菌體顆粒表達(dá)在細(xì)菌表面。
● 通過細(xì)菌培養(yǎng)和噬菌體產(chǎn)出，獲得大量的噬菌體顆粒。
③篩選和選擇：
● 準(zhǔn)備目標(biāo)分子，如蛋白質(zhì)、抗體、小分子化合物等。
● 將噬菌體展示文庫中的噬菌體與目標(biāo)分子進(jìn)行特異性結(jié)合，一般采用固相吸附、免疫篩選等方法。
● 對結(jié)合復(fù)合物進(jìn)行洗滌，以去除非特異性結(jié)合的噬菌體。
● 通過洗脫或者其他方法，獲得與目標(biāo)分子結(jié)合能力較強(qiáng)的噬菌體。
④鑒定和分析：
● 從篩選出的噬菌體中提取基因，一般采用PCR擴(kuò)增的方法。
● 對提取的基因進(jìn)行測序，獲取融合基因的序列信息。
● 分析測序數(shù)據(jù)，確定與目標(biāo)分子結(jié)合的蛋白或多肽序列。
以上是噬菌體展示技術(shù)的基本步驟。在具體應(yīng)用中，可以根據(jù)需要進(jìn)行優(yōu)化和改進(jìn)，例如引入多肽標(biāo)簽用于檢測和純化、引入多重篩選步驟以提高篩選效果等。噬菌體展示技術(shù)的關(guān)鍵是構(gòu)建高質(zhì)量的展示文庫和有效的篩選方法，以獲得具有特定功能和結(jié)合性質(zhì)的目標(biāo)分子。
2、噬菌體展示技術(shù)的應(yīng)用
噬菌體展示技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究、生物制藥和生物技術(shù)領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。以下是一些噬菌體展示技術(shù)的主要應(yīng)用領(lǐng)域：
● 抗體工程：噬菌體展示技術(shù)可用于抗體工程，用于篩選和優(yōu)化具有高親和力和特異性的抗體。通過構(gòu)建噬菌體庫，可以在大規(guī)模的抗體變異體中篩選出與特定抗原結(jié)合能力強(qiáng)的抗體。
● 肽和蛋白質(zhì)工程：噬菌體展示技術(shù)可以用于篩選和改進(jìn)具有特定功能的肽和蛋白質(zhì)。通過展示肽或蛋白質(zhì)變體庫，可以選擇具有特定性質(zhì)的分子，如酶活性、結(jié)合活性、藥物親和性等。
● 藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)：噬菌體展示技術(shù)可用于藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)。通過在噬菌體上展示小分子化合物庫，可以篩選出與特定靶點(diǎn)結(jié)合的潛在藥物候選物。
● 蛋白質(zhì)相互作用研究：噬菌體展示技術(shù)可用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用。通過將兩個蛋白質(zhì)或多肽的編碼序列連接到噬菌體基因組中，可以在噬菌體顆粒表面同時展示這兩個蛋白質(zhì)或多肽，并研究它們之間的結(jié)合性質(zhì)和相互作用機(jī)制。
● 疫苗設(shè)計：噬菌體展示技術(shù)可用于疫苗設(shè)計。通過展示病原體的抗原蛋白質(zhì)或多肽片段，可以誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，產(chǎn)生特定的抗體和免疫應(yīng)答，從而用于疫苗的開發(fā)和疾病預(yù)防。
● 診斷工具和生物傳感器：噬菌體展示技術(shù)可用于開發(fā)診斷工具和生物傳感器。通過展示特定的診斷標(biāo)志物或靶分子，可以用于檢測和監(jiān)測疾病標(biāo)志物、細(xì)菌、病毒等。
3、噬菌體展示技術(shù)中涉及到的一些專屬名詞及釋義
● 噬菌體（Phage）：一種寄生于細(xì)菌的病毒，可以利用其基因組中的外被蛋白基因來展示目標(biāo)蛋白或多肽。
● 噬菌體展示（Phage Display）：將目標(biāo)蛋白或多肽的編碼序列與噬菌體基因組中的外被蛋白基因連接，并通過噬菌體顆粒表面展示目標(biāo)分子的技術(shù)。
● 外被蛋白基因（Coat Protein Gene）：噬菌體基因組中編碼構(gòu)成噬菌體顆粒外被蛋白的基因。
● 噬菌體展示文庫（Phage Display Library）：包含大量噬菌體顆粒的集合體，每個顆粒表面展示著不同的蛋白或多肽變體。
● 多肽標(biāo)簽（Peptide Tag）：在目標(biāo)蛋白或多肽的編碼序列中引入的短小肽段，用于檢測、純化或定位目標(biāo)蛋白或多肽。
● 固相吸附（Solid-phase adsorption）：一種常用的篩選方法，通過將固相材料（如酶聯(lián)免疫吸附板）與目標(biāo)分子結(jié)合，使噬菌體與目標(biāo)分子特異性結(jié)合。
