噬菌體展示產(chǎn)品
噬菌體展示技術(shù)通過(guò)將外源肽段和噬菌體衣殼蛋白融合展示于噬菌體表面,進(jìn)行高通量篩選及富集,并對(duì)所需功能的克隆進(jìn)行定性分析,該技術(shù)展示對(duì)象涵蓋抗體、抗體片段、肽段、cDNA等。在對(duì)抗體庫(kù)的研究中,噬菌體展示技術(shù)可對(duì)人和其他動(dòng)物的B細(xì)胞抗體庫(kù)進(jìn)行體外建庫(kù)篩選,避開(kāi)了免疫和細(xì)胞融合等步驟從而縮短實(shí)驗(yàn)周期并增加了穩(wěn)定性,該技術(shù)還具有篩選容量大、可發(fā)酵大量生產(chǎn)、方法簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。
購(gòu)買NEB 的 3 種隨機(jī)肽庫(kù)包括 7 肽庫(kù)(Ph.D.-7)、12 肽庫(kù)(Ph.D.-12)和含有二硫鍵的環(huán) 7 肽庫(kù)(Ph.D.-C7C)。所有肽庫(kù)的容量超過(guò) 20 億個(gè)克隆。上述 3 種肽庫(kù)表達(dá)的隨機(jī)肽均在噬菌體次要包膜蛋白 pIII 的 N 端,故每一個(gè)病毒粒子可以表達(dá) 5 個(gè)拷貝。
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靶向肽藥物治療:
癌細(xì)胞進(jìn)行隨機(jī)肽庫(kù)篩選,得到高親和力的小肽,應(yīng)用于藥物轉(zhuǎn)載靶向運(yùn)輸,減少機(jī)體副作用。
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模擬表位篩選:
抗體進(jìn)行隨機(jī)肽庫(kù)篩選,得到的多肽,可以推斷出抗體可能識(shí)別的抗原表位。可用于未知病毒及疾病的靶蛋白序列推測(cè)。
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重金屬回收:
噬菌體多肽庫(kù)篩選出可以和金屬結(jié)合的肽段,用于重金屬的回收利用及重金屬污染水質(zhì)土壤的處理。
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篩選蛋白激動(dòng)劑和抑制劑:
噬菌體肽庫(kù)篩選出與某蛋白特異性結(jié)合的多肽,通過(guò)相關(guān)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其激活或者抑制活性的作用。
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化學(xué)新型材料研發(fā):
通過(guò)噬菌體隨機(jī)肽庫(kù)篩選與金屬化合物結(jié)合的肽作為新型的粘合劑,以用于發(fā)現(xiàn)和產(chǎn)生新的復(fù)合材料。
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細(xì)胞表面配受體篩選:
細(xì)胞表面蛋白多為跨膜蛋白,膜蛋白難以表達(dá),或者表達(dá)的蛋白難以保持正確的構(gòu)象。用重組蛋白篩選的抗體,可能不識(shí)別細(xì)胞表達(dá)的抗原。可以用細(xì)胞直接從抗體庫(kù)中篩選出膜蛋白的抗體。
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藥用阻斷劑:
病原體通過(guò)與某一個(gè)受體蛋白結(jié)合后進(jìn)入體內(nèi),通過(guò)篩選與受體蛋白結(jié)合位點(diǎn)相似的表位,在病原體入侵之前進(jìn)行預(yù)防,阻斷病原體與受體蛋白的結(jié)合。
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中和解毒劑:
常規(guī)致毒動(dòng)物的血清可進(jìn)行毒液治療,但是產(chǎn)量及治療效果有限。通過(guò)噬菌體納米抗體庫(kù)篩選出與血清功能類似的中和抗體,利用其組織穿透力和低免疫原性,可提供更好的治療效果。
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雙特異性抗體:
通過(guò)噬菌體納米抗體庫(kù),利用其分子量小,穿透力強(qiáng)的特性,篩選出即可以靶向目的細(xì)胞,也可以裝載藥物的納米抗體,用于靶向藥物治療。
序號(hào) | 庫(kù)類別 | 種屬 | 天然庫(kù)還是免疫庫(kù) | 抗體基因來(lái)源 | 標(biāo)簽(可選) | 庫(kù)容 | 周期 | 交付標(biāo)準(zhǔn) |
1 | ScFv | 人、鼠、兔 | 天然庫(kù) | 外周血 | E-tag/His -tag/HA | ≧9次方 | 8-10周 | ①測(cè)序報(bào)告;②建庫(kù)過(guò)程的檢測(cè)數(shù)據(jù)(抗體基因擴(kuò)增,庫(kù)插入效率檢測(cè),庫(kù)多樣性檢測(cè),其標(biāo)準(zhǔn)為:抗體基因插入比例:90%以上;庫(kù)容:10^8;有效抗體基因比例:70-80%;插入長(zhǎng)度一般是750bp左右,因?yàn)槊總€(gè)抗體的CDR區(qū)長(zhǎng)度不同,所以插入長(zhǎng)度的指標(biāo)一般不做具體要求);③ TG1抗體庫(kù)(或者噬菌體展示抗體庫(kù)) 2030 ml,按照 1ml/管進(jìn)行分裝; |
2 | ScFv | 人、鼠、兔 | 免疫庫(kù) | 外周血/脾臟 | ≧7次方 | 18-24周 | ||
3 | Fab | 人、鼠、兔 | 天然庫(kù) | 外周血 | ≧9次方 | 8-10周 | ||
4 | Fab | 人、鼠、兔 | 免疫庫(kù) | 外周血/脾臟 | ≧7次方 | 18-24周 | ||
5 | sdAb | 羊駝 | 天然庫(kù) | 外周血 | ≧9次方 | 8-10周 | ||
6 | sdAb | 羊駝 | 免疫庫(kù) | 外周血 | ≧9次方 | 18-24周 | ||
7 | sdAb | 羊駝 | 半合成庫(kù) | 外周血 | ≧9次方 | 8-12周 | ||
8 | 個(gè)性化庫(kù)構(gòu)建 | 根據(jù)客戶需求 | 根據(jù)客戶需求 | 根據(jù)客戶需求 | 根據(jù)客戶需求 | 根據(jù)客戶需求 | 具體評(píng)估 |
篩選原類型 | 篩選原標(biāo)準(zhǔn) | 備注 | 交付標(biāo)準(zhǔn) |
單一組分的:重組蛋白、純 化 的 天 然 蛋 白、肽段 | 純度90%及以上 | 若需要驗(yàn)證其他實(shí)驗(yàn),比如 WB 或 FACS 等,價(jià)格另議 | 經(jīng)過(guò)3-4輪篩選,挑取單克隆進(jìn)行ELISAp檢測(cè),以高于空 白及陰性對(duì)照2.2倍為陽(yáng)性克 隆的判斷標(biāo)準(zhǔn),交付至少5個(gè)克隆測(cè)序結(jié)果 |
混合組分的,比如血清純化的抗體 、 組織、細(xì)菌、病毒、細(xì)胞等 | 組織裂解液蛋白抽提之后,總蛋白含量不低于5mg/ml | 經(jīng)過(guò)3-4輪篩選,挑取單克隆進(jìn)行ELISA檢測(cè),以高于空 白及陰性對(duì)照2.2倍為陽(yáng)性克隆的判斷標(biāo)準(zhǔn),交付至少5個(gè)克隆測(cè)序結(jié)果 |
來(lái)源于人CD63(哺乳表達(dá)系統(tǒng))重組蛋白,篩選人源化的VHH噬菌體抗體庫(kù),獲得13條不同的抗體序列,選取其中8個(gè)抗體序列,采用哺乳系統(tǒng)進(jìn)行VHH-FC抗體的重組表達(dá)量較高,重組抗體對(duì)篩選源進(jìn)行ELISA檢測(cè),效價(jià)結(jié)果與篩選結(jié)果相差不大。
編號(hào) | 1F8 | 1G4 | 2A6 | 2H4 | 3B7 | 4F16 | 4H10 | 4A6 |
抗體原液 | 3.1056 | 2.921 | 2.7578 | 2.9423 | 2.575 | 2.7465 | 3.0024 | 2.6425 |
0.111111111 | 2.8245 | 2.5632 | 2.1875 | 2.3023 | 2.3273 | 2.5459 | 2.9412 | 2.1218 |
0.736111111 | 2.421 | 2.1421 | 1.5251 | 1.7012 | 1.7587 | 1.8424 | 2.4102 | 1.6548 |
3.513888889 | 1.652 | 1.3215 | 0.9213 | 1.0214 | 1.2324 | 1.1251 | 1.6248 | 0.8149 |
1:10000 | 0.7212 | 0.5621 | 0.5002 | 0.612 | 0.4521 | 0.5101 | 0.8426 | 0.4258 |
FC空載體表達(dá)對(duì)照 | 0.031 | 0.1023 | 0.2154 | 0.1389 | 0.1027 | 0.0124 | 0.1124 | 0.0296 |
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