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噬菌體展示產(chǎn)品

信息來(lái)源:金開(kāi)瑞 作者:genecreate 發(fā)布時(shí)間:2023-04-21 10:57:00

一、項(xiàng)目介紹

噬菌體展示技術(shù)通過(guò)將外源肽段和噬菌體衣殼蛋白融合展示于噬菌體表面,進(jìn)行高通量篩選及富集,并對(duì)所需功能的克隆進(jìn)行定性分析,該技術(shù)展示對(duì)象涵蓋抗體、抗體片段、肽段、cDNA等。在對(duì)抗體庫(kù)的研究中,噬菌體展示技術(shù)可對(duì)人和其他動(dòng)物的B細(xì)胞抗體庫(kù)進(jìn)行體外建庫(kù)篩選,避開(kāi)了免疫和細(xì)胞融合等步驟從而縮短實(shí)驗(yàn)周期并增加了穩(wěn)定性,該技術(shù)還具有篩選容量大、可發(fā)酵大量生產(chǎn)、方法簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。

01. 噬菌體隨機(jī)肽庫(kù)介紹

購(gòu)買NEB 的 3 種隨機(jī)肽庫(kù)包括 7 肽庫(kù)(Ph.D.-7)、12 肽庫(kù)(Ph.D.-12)和含有二硫鍵的環(huán) 7 肽庫(kù)(Ph.D.-C7C)。所有肽庫(kù)的容量超過(guò) 20 億個(gè)克隆。上述 3 種肽庫(kù)表達(dá)的隨機(jī)肽均在噬菌體次要包膜蛋白 pIII 的 N 端,故每一個(gè)病毒粒子可以表達(dá) 5 個(gè)拷貝。 

02. 噬菌體抗體庫(kù)建庫(kù)及篩選流程介紹
 
二、噬菌體展示庫(kù)應(yīng)用
01. 隨機(jī)肽庫(kù)
  • 靶向肽藥物治療:

    癌細(xì)胞進(jìn)行隨機(jī)肽庫(kù)篩選,得到高親和力的小肽,應(yīng)用于藥物轉(zhuǎn)載靶向運(yùn)輸,減少機(jī)體副作用。

  • 模擬表位篩選:

    抗體進(jìn)行隨機(jī)肽庫(kù)篩選,得到的多肽,可以推斷出抗體可能識(shí)別的抗原表位。可用于未知病毒及疾病的靶蛋白序列推測(cè)。

  • 重金屬回收:

    噬菌體多肽庫(kù)篩選出可以和金屬結(jié)合的肽段,用于重金屬的回收利用及重金屬污染水質(zhì)土壤的處理。

  • 篩選蛋白激動(dòng)劑和抑制劑:

    噬菌體肽庫(kù)篩選出與某蛋白特異性結(jié)合的多肽,通過(guò)相關(guān)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其激活或者抑制活性的作用。

  • 化學(xué)新型材料研發(fā):

    通過(guò)噬菌體隨機(jī)肽庫(kù)篩選與金屬化合物結(jié)合的肽作為新型的粘合劑,以用于發(fā)現(xiàn)和產(chǎn)生新的復(fù)合材料。

 
02. 抗體庫(kù)
  • 細(xì)胞表面配受體篩選:

    細(xì)胞表面蛋白多為跨膜蛋白,膜蛋白難以表達(dá),或者表達(dá)的蛋白難以保持正確的構(gòu)象。用重組蛋白篩選的抗體,可能不識(shí)別細(xì)胞表達(dá)的抗原。可以用細(xì)胞直接從抗體庫(kù)中篩選出膜蛋白的抗體。

  • 藥用阻斷劑:

    病原體通過(guò)與某一個(gè)受體蛋白結(jié)合后進(jìn)入體內(nèi),通過(guò)篩選與受體蛋白結(jié)合位點(diǎn)相似的表位,在病原體入侵之前進(jìn)行預(yù)防,阻斷病原體與受體蛋白的結(jié)合。

  • 中和解毒劑:

    常規(guī)致毒動(dòng)物的血清可進(jìn)行毒液治療,但是產(chǎn)量及治療效果有限。通過(guò)噬菌體納米抗體庫(kù)篩選出與血清功能類似的中和抗體,利用其組織穿透力和低免疫原性,可提供更好的治療效果。

  • 雙特異性抗體:

    通過(guò)噬菌體納米抗體庫(kù),利用其分子量小,穿透力強(qiáng)的特性,篩選出即可以靶向目的細(xì)胞,也可以裝載藥物的納米抗體,用于靶向藥物治療。

 

 

三、報(bào)價(jià)與周期
01. 建庫(kù)
序號(hào) 庫(kù)類別 種屬 天然庫(kù)還是免疫庫(kù) 抗體基因來(lái)源 標(biāo)簽(可選) 庫(kù)容 周期 交付標(biāo)準(zhǔn)
1 ScFv 人、鼠、兔 天然庫(kù) 外周血 E-tag/His -tag/HA ≧9次方 8-10周 ①測(cè)序報(bào)告;②建庫(kù)過(guò)程的檢測(cè)數(shù)據(jù)(抗體基因擴(kuò)增,庫(kù)插入效率檢測(cè),庫(kù)多樣性檢測(cè),其標(biāo)準(zhǔn)為:抗體基因插入比例:90%以上;庫(kù)容:10^8;有效抗體基因比例:70-80%;插入長(zhǎng)度一般是750bp左右,因?yàn)槊總€(gè)抗體的CDR區(qū)長(zhǎng)度不同,所以插入長(zhǎng)度的指標(biāo)一般不做具體要求);③ TG1抗體庫(kù)(或者噬菌體展示抗體庫(kù)) 2030 ml,按照 1ml/管進(jìn)行分裝;
2 ScFv 人、鼠、兔 免疫庫(kù) 外周血/脾臟 ≧7次方 18-24周
3 Fab 人、鼠、兔 天然庫(kù) 外周血 ≧9次方 8-10周
4 Fab 人、鼠、兔 免疫庫(kù) 外周血/脾臟 ≧7次方 18-24周
5 sdAb 羊駝 天然庫(kù) 外周血 ≧9次方 8-10周
6 sdAb 羊駝 免疫庫(kù) 外周血 ≧9次方 18-24周
7 sdAb 羊駝 半合成庫(kù) 外周血 ≧9次方 8-12周
8 個(gè)性化庫(kù)構(gòu)建 根據(jù)客戶需求 根據(jù)客戶需求 根據(jù)客戶需求 根據(jù)客戶需求 根據(jù)客戶需求 具體評(píng)估
 
02. 篩選+測(cè)序+分析
篩選原類型 篩選原標(biāo)準(zhǔn) 備注 交付標(biāo)準(zhǔn)
單一組分的:重組蛋白、純 化 的 天 然 蛋 白、肽段 純度90%及以上 若需要驗(yàn)證其他實(shí)驗(yàn),比如 WB 或 FACS 等,價(jià)格另議 經(jīng)過(guò)3-4輪篩選,挑取單克隆進(jìn)行ELISAp檢測(cè),以高于空 白及陰性對(duì)照2.2倍為陽(yáng)性克 隆的判斷標(biāo)準(zhǔn),交付至少5個(gè)克隆測(cè)序結(jié)果
混合組分的,比如血清純化的抗體 、 組織、細(xì)菌、病毒、細(xì)胞等 組織裂解液蛋白抽提之后,總蛋白含量不低于5mg/ml 經(jīng)過(guò)3-4輪篩選,挑取單克隆進(jìn)行ELISA檢測(cè),以高于空 白及陰性對(duì)照2.2倍為陽(yáng)性克隆的判斷標(biāo)準(zhǔn),交付至少5個(gè)克隆測(cè)序結(jié)果

 

人源SCFV抗體庫(kù)文庫(kù)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)展示
IGKV germline distribution
Length of VK-CDR1
Length of VK-CDR3
IGλV germline distribution
 
Length of Vλ-CDR1
Length of Vλ-CDR3
IGHV germline distribution
 
Length of VH-CDR1
Length of VH-CDR3

 

四、噬菌體隨機(jī)肽庫(kù)篩選
 
ELISA檢測(cè)結(jié)果-1
 
ELISA檢測(cè)結(jié)果-2
 
來(lái)源于豬流行性腹瀉病毒單抗,篩選噬菌體12肽隨機(jī)肽庫(kù),從中選取讀值較高的陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序,獲得7條不同的序列,通過(guò)與靶標(biāo)蛋白進(jìn)行比對(duì),對(duì)識(shí)別的具體表位進(jìn)行鑒定。
陽(yáng)性克隆重復(fù)率
陽(yáng)性克隆OD值
 
人源化的VHH噬菌體抗體庫(kù)篩選

來(lái)源于人CD63(哺乳表達(dá)系統(tǒng))重組蛋白,篩選人源化的VHH噬菌體抗體庫(kù),獲得13條不同的抗體序列,選取其中8個(gè)抗體序列,采用哺乳系統(tǒng)進(jìn)行VHH-FC抗體的重組表達(dá)量較高,重組抗體對(duì)篩選源進(jìn)行ELISA檢測(cè),效價(jià)結(jié)果與篩選結(jié)果相差不大。

陽(yáng)性克隆重復(fù)率
陽(yáng)性克隆OD值
重組抗體VHH-FC表達(dá)
 
 
重組VHH-FC抗體ELISA檢測(cè)
編號(hào) 1F8 1G4 2A6 2H4 3B7 4F16 4H10 4A6
抗體原液 3.1056 2.921 2.7578 2.9423 2.575 2.7465 3.0024 2.6425
0.111111111 2.8245 2.5632 2.1875 2.3023 2.3273 2.5459 2.9412 2.1218
0.736111111 2.421 2.1421 1.5251 1.7012 1.7587 1.8424 2.4102 1.6548
3.513888889 1.652 1.3215 0.9213 1.0214 1.2324 1.1251 1.6248 0.8149
1:10000 0.7212 0.5621 0.5002 0.612 0.4521 0.5101 0.8426 0.4258
FC空載體表達(dá)對(duì)照 0.031 0.1023 0.2154 0.1389 0.1027 0.0124 0.1124 0.0296

 




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