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技術(shù)貼|史上最全I(xiàn)HC攻略，這誰頂?shù)米。?/h1>
信息來源：金開瑞作者：genecreate 發(fā)布時間：2019-10-30 13:22:37

金開瑞定制抗體的IHC驗證圖

抗體的IHC

金開瑞專注于抗體定制多年，一站式的抗體服務(wù)、多樣性的宿主系統(tǒng)、規(guī)模化的生產(chǎn)、嚴(yán)格的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，使得金開瑞的定制抗體穩(wěn)定可靠，滿足客戶的應(yīng)用需求，深受國內(nèi)外客戶的歡迎。

一張漂亮的IHC圖是怎么誕生的？實驗過程中我們應(yīng)該注意些什么呢？

話不多說，直接上干貨，現(xiàn)在小編就跟大家分享IHC 實驗中可能出現(xiàn)的各種問題及應(yīng)對策略，希望給科研君的實驗帶來實實在在的幫助~

問題	原因	解決方案
邊緣效應(yīng)	組織邊緣貼附不牢，邊緣組織松脫漂浮于液體中	PES/多聚賴氨酸處理玻片；組織切片盡量??；盡量避免選用壞死較多的組織
邊緣效應(yīng)	試劑未充分覆蓋組織	滴加試劑時讓試劑完全覆蓋組織
非特異性染色	抗體質(zhì)量問題	使用質(zhì)量有保證的抗體
	抗體孵育時間長	減少孵育時間
	抗體濃度過高	降低抗體濃度
	一抗為多抗	使用單克隆抗體
	內(nèi)源性過氧化物酶及生物素	延長滅活時間
	封閉不足	延長封閉時間
	DAB孵育時間過久或濃度過高	按說明書配置試劑，鏡下控制反應(yīng)時間
	抗體孵育后洗滌不充分	每次孵育之后洗3*5次
	實驗過程干片	及時滴加試劑
陰性結(jié)果	抗體濃度及質(zhì)量	選擇有質(zhì)量保證的抗體，先做預(yù)實驗摸索抗體使用濃度
	抗原修復(fù)不足	摸索合適的抗原修復(fù)方式及修復(fù)時間
	封閉時間過長	減少封閉時間
	DAB孵育時間短	鏡下控制顯色時間
	細(xì)胞通透不全，抗體未能進入細(xì)胞反應(yīng)	選擇合適的通透劑及其反應(yīng)時間
	一抗二抗不匹配	選擇正確來源的二抗
脫片	玻片未處理好	玻片清洗干凈后用APES或多聚賴氨酸處理
	切片厚薄不均勻	更換刀片；調(diào)整好切片機狀態(tài)
	烤片時間或溫度不夠	60℃ 2小時
	組織自身問題	腫瘤壞死組織及骨組織本身易脫片
	抗原修復(fù)時溫度迅速變化	抗原修復(fù)后讓其自然冷卻
染色弱	抗體濃度低，孵育時間短	提高抗體濃度，延長反應(yīng)時間
	試劑使用超過有效期	試劑定時更新
	滴加試劑時殘余緩沖液過多使試劑稀釋	滴加試劑前盡量減少殘余液體
	封閉過度	減少封閉時間
著色不均勻	切片厚度不一致	更換刀片；調(diào)整好切片機狀態(tài)
	試劑配制未混勻使局部濃度不一致	試劑充分混勻后滴加
	試劑未完全覆蓋組織	滴加試劑時讓試劑完全覆蓋組織
	脫蠟不完全	更換脫蠟劑或延長脫蠟時間