知無不“研” | 單多抗怎么選？
信息來源：金開瑞 作者：genecreate 發布時間：2020-09-22 14:01:16
多克隆抗體（polyclonal antibody, pAb）：用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動物，可刺激機體多個B細胞克隆，產生針對多種抗原表位的不同抗體。所獲得的免疫血清實際上是含有多種抗體的混合物，即多克隆抗體。
單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體，稱為單克隆抗體。通常采用雜交瘤技術來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。
★單多抗優缺點★
★單多抗優缺點★
如果對抗體的特異性要求高，用量較大或需要長期使用一致的抗體，制備的抗體應用要求多（WB/IP/IF/ICC等)，可以選擇制備單克隆抗體。
多克隆抗體的特異性較差，即使是使用相同的抗原制備多抗，不同批次間也會存在差異，因而在特異性、一致性方面有很大的局限。所以在用多抗做免疫檢測時，更容易造成背景，例如在WB 中有雜帶，在IHC 中背景較深等等。雖然還存在著交叉反應的問題，但由于多抗識別多個抗原表位，即使是有少數幾個抗原表位被破壞或者抗原構象改變，實驗的結果也不會受到影響。另外多抗需要免疫原的量大，如果免疫原制備困難，建議制備單抗。
若對抗體的特異性要求不高，需要做沉淀和凝集反應的檢測性實驗或者只需做ELISA檢測，可以選擇制備多克隆抗體。
多抗相比較單抗仍然有制備時間短、首次制備成本低的特點，在一些情況下也是一種選擇。另外，在相同條件下，使用多抗可以提高檢測的靈敏度，對于豐度偏低的蛋白也更容易檢出的選擇.
★抗原的選擇★
抗原的選擇可以是天然蛋白、重組可溶蛋白、重組變性蛋白和多肽，抗原質量越高，最終制備高質量抗體的幾率也會越大！目前抗體制備常采用重組蛋白或多肽作為抗原。
常規情況下，重組蛋白作為抗原往往含有更多的抗原決定簇，既有空間表位，也會有線形序列表位，對于機體的免疫刺激也會相對充分一些，那么最終獲取應用面較廣的抗體幾率也會大很多，尤其是目的蛋白已證明有修飾或者復雜結構的，一般都會優先選擇重組蛋白。
當然也有必須用多肽制備的，比如對同源家族某一個蛋白抗體的制備，同源性非常高的，需要找到特異性aa合成多肽，再或者一些修飾化抗體，需要在多肽合成階段定點修飾某些AA來制備抗體。抗原多肽選擇一般遵循如下基本原則1.盡可能是在蛋白表面；2.保證該段序列不形成α-helix；3.N，C端的肽段比中間的肽段更好；4.避免蛋白內部重復或接近重復段的序列；5.避免同源性太強的肽段；6.交聯可以交聯在N，C兩端，選擇依據就是交聯在對產生抗體不太重要的一端；7.序列中不能有太多的Pro，但有一兩個Pro有好處，可以使肽鏈結構相對穩定一些，對產生特異性抗體有益。
抗體制備合作案例
案例一（MRJP1單抗制備）
In-depth Proteome ofthe Hypopharyngeal Glands of Honeybee Workers Reveals Highly Activated Protein and Energy Metabolism in Priming the Secretion ofRoyal Jelly.
Polyclonal rabbitantibodies against 60S ribosomal proteins RpL28, RpL26, and 40Sribosomal protein S4 (RpS4), and the monoclonal mouse antibodyagainst major royal jelly protein 1 (MRJP1) were developed(Genecreate Biological Engineering, Wuhan, China).
案例二（制備CHIL-4和ChIFN-4的單抗）
Multiplex immunoassay of chicken cytokines via highly-sensitive chemiluminescent imaging array，Analytica Chimica Acta.
For the firstincubation, the surface capture of the cytokines by their respectiveprimary antibodies anti-ChIL-4 and anti-ChIFN-γ, the subsequent CLintensity value increased with increasing incubation time up to amaximum at 30 min (Fig.2a). For the second step, formation of thesandwich via the attachment of the Ab2-AuNP-HRP probe to the exposedAb1-cytokine-immunocomplex, the maximum CL value was similarlyreached with only a 25 min incubation (Fig.2b).
案例三（ZmREM1.3抗體）
Comparative proteomics combined with analyses of transgenic plants reveal ZmREM1.3 mediates maize resistance to southern corn rust. Plant Biotechnology Journal.
Western blot analysis of ZmREM1.3 in transgenic maize lines 227, 229, 231 and 233 as well as the corresponding non-transgenic sib lines, with b-actin as the loading control.
金開瑞抗體定制平臺，由多位應用設計專家和工程設計專家合力打造而成，所有技術人員均擁有多年抗原設計，制備單/多克隆抗體的工業過程開發及生產經驗。平臺建立以來，已成功為客戶制備了多種高質量抗體，其中部分達到臨床應用質量標準。
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