書接上文，上回我們聊到了酵母雜交自激活現象的產生原因及其應對策略，這期我們來嘮一嘮膜體系酵母雙雜載體怎么選擇。

DUAL membrane 系統(DUAL membrane system)首先由瑞士的Dualsystems Biotech AG 公司開發出來，是基于分離的泛素(split-ubiquitin)介導的膜蛋白酵母雙雜交系統。可介導蛋白降解的泛素(ubiquitin)被分為：

①Cub（C端結構域）

②Nub（N端結構域）：第三位的I被突變為G得到NubG，NubG在bait和prey互作下結構重構，與Cub發生互作

膜蛋白酵母雙雜交-Dualsystems split ubiquitin原理是：

Cub與LexA-VP16轉錄激活因子連接成Cub-LexA-VP16，當bait-Cub-LexA-VP16與prey-NubG可互作時，Cub與NubG在空間上接近發生重構，被泛素特異性蛋白酶UBPs識別，LexA-VP16被解離進入核內，使啟動子下游基因（抗性篩選、藍白斑篩選、營養缺陷型篩選等）得到轉錄。

膜體系酵母雙雜選擇載體是根據誘餌蛋白質定位的不同來選擇，有利于互作蛋白相連的泛素NubG和Cub-LexA-VP16相互作用，被UBPs識別，從而啟動下游報告基因表達。主要分為以下幾種情況：

1. 若誘餌蛋白的N端在胞質，C端在細胞器腔內（或者胞外），建議用pBT3-N載體構建誘餌。

2. 若誘餌蛋白是C端位于胞質，N端位于細胞器腔內（或者胞外），且N端含有信號肽，選擇載體pBT3-SUC構建誘餌重組質粒，這是因為某些哺乳動物細胞的信號肽在酵母中無法識別，而pBT3-SUC中含有一段酵素轉化酶（SUC2）基因序列，當其定位在誘餌蛋白N端，能夠確保誘餌蛋白正確定位到酵母細胞膜上。

圖片來源于DUAL membrane pairwise interaction kit user manual

從載體的圖譜上中可以看出，cDNA插入位點（sifI位點）的上游是SUC2，下游是Cub-LexA-VP16。這樣表達后誘餌蛋白N端就含有SUC， C端含有Cub-LexA-VP16，誘餌蛋白就能夠定位在膜上，并且和互作蛋白的NubG相互作用。

3. 若誘餌蛋白是C端在胞質，N端在細胞器腔內（或者胞外），且N端不含信號肽，推薦使用pBT3-STE。

4. 如果你的誘餌蛋白N端C端均位于胞質，則pBT3-N和pBT3-STE都可以選擇。

5. 膜體系的獵物（Prey）載體分別為pPR3-N和pPR3-C。NubG在獵物蛋白N端時建議用pPR3-N。NubG在獵物蛋白C端時采用建議用pPR3-C。

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