一個高質(zhì)量的ELISA試劑盒是如何誕生的
信息來源：金開瑞 作者：genecreate 發(fā)布時間：2019-09-23 10:50:58
傳說中，一個高質(zhì)量的ELISA試劑盒，在準確度、精密度、靈敏度、特異性、穩(wěn)定性等方面都有著異于常盒的表現(xiàn)。
那么，一個高質(zhì)量的ELISA試劑盒，究竟是如何誕生的呢？
下面，就跟隨我們的一個真實案例，一起去看看吧~~
試劑盒開發(fā)之前，經(jīng)過與客戶的具體溝通，我們了解到客戶的實際需求，
并制定了以下開發(fā)流程：
基因合成及載體構(gòu)建——重組蛋白制備——動物免疫——抗體對篩選——ELISA試劑盒開發(fā)
下面，就讓我們來具體看看吧：
1、重組蛋白制備
我們先針對目標蛋白的表達難度、抗原表位、結(jié)構(gòu)域及同源性做了全面且細致的分析評估，確定了抗原的表達區(qū)間，然后采用大腸表達系統(tǒng)，制備出了純度不低于90%的重組蛋白用于免疫。
2、動物免疫
我們采取2種方案，免疫8只BalB/C小鼠，效價如下：
3、抗體篩選
抗體篩選階段，我們首先采用高通量融合篩選方式，將內(nèi)源樣本的檢測及表位分組提前在亞克隆階段，大大提高了抗體制備的成功率和篩選的主動性。
在經(jīng)過亞克隆階段驗證和抗體純化后，我們最終得到的抗體效價如下：
4、ELISA試劑盒開發(fā)
為了保證所開發(fā)的ELISA試劑盒的質(zhì)量，我們對最后到達質(zhì)控平臺的抗體原料做了檢測限標曲調(diào)試，并從熱穩(wěn)定性以及同類指標的交叉反應等方面驗證了抗體批內(nèi)批間的變異系數(shù)，對抗體對的性能做了全面的評估。
此后，我們建立了ELISA檢測方法，確定了標準曲線及線性范圍，并提供ELISA基本參數(shù)進行評價，建立了樣品檢測及評價方法。
- 標曲確定
- 測樣初定量
- 凍干驗證及測樣
-
熱穩(wěn)定性測試
- 樣本線性測試
- LOD及批內(nèi)批間測試
最終開發(fā)出的試劑盒檢測范圍為0.03125 ng/mL-2 ng/mL，靈敏度為10.242 pg/mL，批內(nèi)差CV%<8%，批間差CV%<10%，且在特異性方面只識別目標蛋白，與其他相關(guān)蛋白無交叉反應。
（文中所有數(shù)據(jù)圖片均經(jīng)客戶同意后公開)
至此，一個ELISA試劑盒就誕生了
總結(jié)一下，ELISA試劑盒的質(zhì)量取決于其原料，也就是抗體對的質(zhì)量
抗體對的質(zhì)量體現(xiàn)在它的靈敏度、穩(wěn)定性和交叉反應
我們在抗原設計和抗體篩選階段，就將其應用考慮進去，提高抗體制備的成功率，也大大保證了抗體對的質(zhì)量。
金開瑞擁有基因合成平臺、蛋白表達平臺、抗體制備平臺，并具備多年的試劑盒開發(fā)經(jīng)驗。提供從基因合成、抗原制備、抗體制備到ELISA試劑盒生產(chǎn)的一站式服務，帶給您前所未有的便利。
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