【周二直播預(yù)告】染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（ChIP），“研”無(wú)不盡！

信息來(lái)源：金開瑞作者：genecreate 發(fā)布時(shí)間：2020-11-02 09:32:11

人類已經(jīng)無(wú)法阻止DNA與蛋白不停地秀恩愛了，它們纏綿悱惻的互作情感給大家的課題研究帶來(lái)了不少苦頭。目前，不斷發(fā)展的研究DNA和蛋白質(zhì)相互作用的方法和技術(shù)，已經(jīng)成為研究DNA復(fù)制、重組、修復(fù)和轉(zhuǎn)錄的核心。今天小金要跟大家分享的是耳熟能詳?shù)娜旧|(zhì)免疫共沉淀方法，這也是我們下周二直播的主題!

金開瑞第二季實(shí)驗(yàn)直播安排表

染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（Chromatin immunoprecipitation assay, ChIP）是將樣品中同抗體靶蛋白相互作用的DNA隨免疫復(fù)合物沉淀，是研究體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA相互作用的有力工具，利用該技術(shù)不僅可以檢測(cè)體內(nèi)反式因子與DNA的動(dòng)態(tài)作用，還可以用來(lái)研究組蛋白的各種共價(jià)修飾以及轉(zhuǎn)錄因子與基因表達(dá)的關(guān)系。

ChIP實(shí)驗(yàn)流程

應(yīng)用領(lǐng)域

判斷DNA鏈的某一特定位置會(huì)出現(xiàn)何種組蛋白修飾
檢測(cè)RNA polymerase II及其它反式因子在基因組上結(jié)合位點(diǎn)的精確定位
研究組蛋白共價(jià)修飾與基因表達(dá)的關(guān)系
轉(zhuǎn)錄因子研究

ChIP抗體問題

需要選用經(jīng)過ChIP驗(yàn)證的商品化抗體，這類抗體常會(huì)標(biāo)明ChIP grade。無(wú)ChIP驗(yàn)證有IP驗(yàn)證的抗體可以嘗試使用。
蛋白難以找到ChIP級(jí)抗體：較常用的方式可以將目的蛋白同某種標(biāo)簽融合表達(dá)，比如HA、GFP、Myc等標(biāo)簽，使用這些標(biāo)簽抗體的ChIP級(jí)抗體，這種途徑也常見于發(fā)表文獻(xiàn)中。無(wú)ChIP驗(yàn)證有IP驗(yàn)證的抗體可以嘗試使用。
一個(gè)樣本需要準(zhǔn)備的抗體量至少應(yīng)＞10μg或10μl，建議盡量提供或代購(gòu)過量的抗體，項(xiàng)目完成后我們可以寄回給客戶。
單抗的風(fēng)險(xiǎn)在于其識(shí)別表位可能恰好被掩蔽（DNA或交聯(lián)環(huán)節(jié)），而多抗可識(shí)別多個(gè)表位可基本避免該風(fēng)險(xiǎn)。因此單多抗各有優(yōu)缺點(diǎn)，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注該抗體是否經(jīng)過ChIP驗(yàn)證。

ChIP樣品問題

樣本選擇：特定的時(shí)期，特定的組織。
每一份獨(dú)立樣品的最低需要量，動(dòng)物細(xì)胞＞2x107，動(dòng)物組織＞1g，植物組織＞4g。
動(dòng)植物組織樣品需在離體后盡快液氮速凍、-80℃保存至寄送。植物組織盡量選取幼嫩新鮮部分。樣品寄送須使用足量干冰。
對(duì)于特殊處理或珍貴樣品，可以把交聯(lián)試劑寄給客戶，客戶在我們指導(dǎo)下完成交聯(lián)后，再干冰寄送，對(duì)于成功率很有好處、尤其是轉(zhuǎn)錄因子。

因?yàn)镃hIP實(shí)驗(yàn)涉及的步驟多，結(jié)果的重復(fù)性較低，所以對(duì)ChIP實(shí)驗(yàn)過程的每一步都應(yīng)設(shè)計(jì)相應(yīng)的對(duì)照，而且對(duì)結(jié)果的分析也需要有一定的經(jīng)驗(yàn)。如果ChIP實(shí)驗(yàn)方面有什么問題，歡迎周二晚八點(diǎn)來(lái)直播間與我們交流哦！