首頁(yè) 集團(tuán)概況技術(shù)專(zhuān)題

最后一期！最后一期！最后一期！

信息來(lái)源：金開(kāi)瑞作者：genecreate 發(fā)布時(shí)間：2020-12-07 14:39:36

白駒過(guò)隙，轉(zhuǎn)眼第二季八期直播只剩下最后一期
每周二晚八點(diǎn)，一期一項(xiàng)分子互作技術(shù)
觀看過(guò)直播的你一定學(xué)到了不少實(shí)驗(yàn)小技巧吧
錯(cuò)過(guò)往期直播的同學(xué)們可以掃描上方海報(bào)上的二維碼不限次觀看回放
2020年12月8日（周二）20:00
最后一期直播
希望（還）能在直播間見(jiàn)到大家丫
RIP

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RIP技術(shù)簡(jiǎn)介

RIP 技術(shù)（RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay，RNA 結(jié)合蛋白免疫沉淀）主要是運(yùn)用針對(duì)目標(biāo)蛋白的抗體把相應(yīng)的RNA-蛋白復(fù)合物沉淀下來(lái)，經(jīng)過(guò)分離純化就可以對(duì)結(jié)合在復(fù)合物上的RNA 進(jìn)行q-PCR驗(yàn)證或者測(cè)序分析。RIP 是研究細(xì)胞內(nèi)RNA 與蛋白結(jié)合情況的技術(shù)，是了解轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)動(dòng)態(tài)過(guò)程的有力工具，可以幫助我們發(fā)現(xiàn)miRNA 的調(diào)節(jié)靶點(diǎn)。根據(jù)需求，金開(kāi)瑞可以提供RNA/蛋白、RNA/RNA互作驗(yàn)證RIP技術(shù)服務(wù)。

RIP

(圖片來(lái)源于A long noncoding RNA activated by TGF-beta promotes the invasion-metastasis cascade in hepatocellular carcinoma）

RIP應(yīng)用

a)用抗體或表位標(biāo)記物捕獲細(xì)胞核內(nèi)或細(xì)胞質(zhì)中內(nèi)源性的RNA結(jié)合蛋白；
b)防止非特異性的RNA的結(jié)合；
c)免疫沉淀把RNA結(jié)合蛋白及其結(jié)合的RNA一起分離出來(lái)；
d)結(jié)合的RNA序列通過(guò)定量RT-PCR或高通量測(cè)序（RIP-Seq）方法來(lái)鑒定。

RIP實(shí)驗(yàn)優(yōu)勢(shì)

a）取材可以選擇該目的蛋白所在物種、特定模型細(xì)胞，因此RIP能夠反應(yīng)RNA-蛋白在天然細(xì)胞狀態(tài)下存在的互作關(guān)系；
b）找出RBP直接/間接互作的RNA，研究復(fù)合體組成；
c）RIP-q-PCR驗(yàn)證RNA pull down-MS篩選的蛋白，避免假陽(yáng)性。

RIP實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

a）抗體：RIP實(shí)驗(yàn)需要IP級(jí)別抗體（也可以是標(biāo)簽抗體）
b）樣品：
由于RIP裂解液較為特殊，且處理?xiàng)l件較為溫和。故對(duì)于樣品物種及樣品類(lèi)型有一定要求。
動(dòng)物類(lèi)細(xì)胞樣品均適用；組織樣品則需要評(píng)估（組織樣品中雜質(zhì)較多、處理時(shí)間較長(zhǎng)等因素會(huì)影響RIP實(shí)驗(yàn)結(jié)果），
植物、細(xì)菌、真菌等含有細(xì)胞壁或類(lèi)似物的物種及其樣品無(wú)法做RIP實(shí)驗(yàn)，
植物原生質(zhì)體等與動(dòng)物組織類(lèi)似，可以嘗試來(lái)做RIP，但是結(jié)果也會(huì)存在一定風(fēng)險(xiǎn)。

RIP服務(wù)流程

RIP