雙熒光素酶檢測是轉錄調控研究中十分重要的實驗手段，主要應用于啟動子和轉錄因子，以及miRNA和其靶基因互作的驗證。

    在雙熒光素酶檢測中，將螢火蟲熒光素酶作為實驗報告基因，海腎熒光素酶作為對照報告基因。實驗報告基因用于測試實驗條件下基因的表達，而對照報告基因作為內對照。

    以熒光素為底物來檢測螢火蟲熒光素酶活性，熒光素酶可以催化熒光素，在熒光素氧化的過程中會發出生物熒光，然后通過化學發光儀測定。

    microRNA靶基因包括mRNA、lncRNA、circRNA。對于microRNA表達量較高的細胞，可以同時構建microRNA的inhibitor進行驗證。

雙熒光素酶實驗的其他應用：

    1. 啟動子結構分析：將待測啟動子區域序列進行分段截短，或對特定位點進行突變，再分別插入報告基因上游，檢測其啟動子的活性。

    2. 啟動子SNP分析：一些基因的啟動子區域存在單核苷酸多態性，將待測啟動子插入報告基因上游，檢測螢光素酶活性，從而判斷這些啟動子的相對活性。