免疫組化染色(IHC)實驗步驟
IHC免疫組化染色(Immunohistochemistry)是常用的組織學檢測技術,用于檢測組織中的蛋白質表達情況。
以下是一般的IHC實驗步驟:
取得組織樣本:通常是通過組織切片或細胞制備薄片來獲取組織樣本。
固定組織樣本:使用適當的固定劑(如福爾馬林)將組織樣本固定在載玻片上,以保持其形態結構。
抗原回復:將組織樣本進行抗原回復處理,以增強抗原的可用性。這一步通常涉及樣本的加熱處理(如高溫蒸壓或酶消化)。
阻斷非特異性結合:使用非特異性抗體或其他方法,阻斷組織中非特異性結合位點,減少假陽性結果。
孵育一抗:在特定條件下,使用特異性一抗與目標蛋白結合。這一步通常需要將載玻片放入含有一抗的緩沖液中,并進行適當的孵育時間和溫度。
洗滌:將載玻片洗滌,去除無結合的一抗和非特異性結合物。
孵育二抗:使用與一抗體來源物種不同的二抗(如兔抗小鼠IgG)與一抗結合。二抗通常標記有染色劑(如酶、熒光劑等)。
洗滌:將載玻片洗滌,去除無結合的二抗體。
可視化:根據染色劑的類型,選擇適當的檢測方法進行可視化。例如,如果使用酶作為染色劑,則可以使用底物進行染色反應,形成可見的染色產物。
蓋玻片:使用透明封蓋膠或其他材料將載玻片蓋好,以保護樣本。
以上是一般的免疫組化染色步驟,具體操作可能會因實驗目的、抗體選擇和儀器設備等而有所不同。在進行實驗前,請確保閱讀并遵循相關實驗室的操作規程,并遵守安全操作規范。
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