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蛋白質-蛋白質相互作用研究

信息來源：金開瑞作者：genecreate 發布時間：2017-06-03 17:02:54

在所有細胞中，蛋白質是最重要的組成部分，并且在大多數細胞功能中蛋白質間的相互作用是最基本的活動。蛋白質與蛋白質之間相互作用構成了細胞生化反應網絡的一個主要組成部分，蛋白質—蛋白質互作網絡是生物信息調控的主要實現方式，是決定細胞命運的關鍵因素。研究蛋白-蛋白相互作用是理解生命活動的基礎，是后基因組時代最重要的研究領域之一。

金開瑞依托六大核心技術平臺，提供獨有的AP-SWATH及酵母雙雜交、噬菌體展示、免疫共沉淀（Co-IP）、GST融合蛋白沉降（GST-pull down）等經典蛋白-蛋白相互作用研究技術服務，幫助您理清轉錄調控過程，發現互作蛋白，加速研究進程。

一、AP-SWATH

SWATH（Sequential Window Acquisition of all THeoretical Mass Spectra）是瑞士蘇黎世聯邦理工學院的Ruedi Aebersold 博士及其團隊與AB-SCIEX聯合推出的一項全新的質譜技術。具有靈敏度高、可重現性高、定量準確度高、線性動態范圍廣、通量大等特點。

金開瑞借助高精度質譜平臺，開發了一套從實驗到生物信息分析的AP-SWATH流程，采用TAP技術將目標靶蛋白的相互作用蛋白特異性富集，然后結合具有高靈敏度、高準確度、高通量等特點的SWATH定量，能夠高特異性的準確富集到靶蛋白的特異性相互作用蛋白，實現復合蛋白質的準確鑒定。

二、酵母雙雜交

酵母雙雜交系統是當前廣泛用于蛋白質相互作用組學研究的一種重要方法。其原理是當靶蛋白和誘餌蛋白特異結合后，誘餌蛋白結合于報道基因的啟動子，啟動報道基因在酵母細胞內的表達，如果檢測到報道基因的表達產物，則說明兩者之間有相互作用，反之則兩者之間沒有相互作用。將這種技術微量化、陣列化后則可用于大規模蛋白質之間相互作用的研究。

金開瑞提供酵母雙雜交文庫構建和篩選技術服務，基于較齊全的cDNA文庫，通過將已知基因作為誘餌，從選定的文庫中篩選出與誘餌蛋白存在特異相互作用的蛋白，材料用量少，獲得全長的比例高。

三、噬菌體展示

噬菌體展示技術通過將外源肽段和噬菌體衣殼蛋白融合展示于噬菌體表面，進行高通量篩選及富集，并對所需功能的克隆進行定性分析，展示對象涵蓋抗體、抗體片段、肽段、cDNA等。該技術也可用來研究蛋白之間的相互作用，不僅有高通量及簡便的特點，還具有直接得到基因、高選擇性的篩選復雜混合物、在篩選過程中通過適當改變條件可以直接評價相互結合的特異性等優點。

金開瑞噬菌體平臺除提供互作蛋白篩選外，還提供抗體庫構建、抗體片段庫構建、雙特異性抗體定制及抗體人源化服務。

四、免疫共沉淀（Co-IP）

免疫共沉淀也是研究蛋白-蛋白相互作用的一種經典技術，是將樣品中同抗體靶蛋白相互作用的蛋白一同隨免疫復合物沉淀，可以檢測兩種目標蛋白質是否在體內存在相互作用，也可以確定一種蛋白在體內的相互作用蛋白。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內天然與興趣蛋白結合的，符合體內實際情況，得到的蛋白可信度較高。

金開瑞檢測分析平臺提供包括Co-IP在內的IHC、WB、ELISA、IF、ChIP等各種免疫學檢測技術服務，成熟的免疫學檢測體系，經驗豐富的技術員，優良的實驗環境，并結合完善的實驗平臺，從實驗數據相互印證、文章投稿的充實性等方面為您提供最優質的服務。

五、GST融合蛋白沉降（GST-pull down）

蛋白質相互作用的類型有牢固型相互作用和暫時型相互作用兩種。牢固型相互作用以多亞基蛋白復合體常見，最好通過免疫共沉淀(Co-IP)或Pull-down技術研究。Pull-down技術用固相化的、已標記的餌蛋白或標簽蛋白(生物素-、PolyHis-或GST-)，從細胞裂解液中釣出與之相互作用的蛋白。通過Pull-down技術可以確定已知的蛋白與釣出蛋白或已純化的相關蛋白間的相互作用關系，從體外傳路或翻譯體系中檢測出蛋白相互作用關系。

金開瑞所提供的GST pull down檢測技術服務，使用特異性二抗進行檢測，能有效避免抗體重鏈對結果的信號干擾，顯著提升檢測效果。

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