EMSA電泳遷移率實(shí)驗(yàn)
凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)是一種研究蛋白質(zhì)和DNA序列相互結(jié)合的技術(shù)，可用于定性或定量分析。
蛋白質(zhì)可以與生物素標(biāo)記的核酸探針結(jié)合，電泳時(shí)這種復(fù)合物比無(wú)蛋白結(jié)合的探針在凝膠中泳動(dòng)的速度慢，即表現(xiàn)為相對(duì)滯后。
目的蛋白與生物素標(biāo)記的DNA探針結(jié)合，電泳時(shí)蛋白-DNA復(fù)合物比無(wú)蛋白結(jié)合的DNA探針在凝膠中泳動(dòng)的速度慢，顯影出現(xiàn)相對(duì)滯后條帶。
用于驗(yàn)證探針是否含有可與蛋白質(zhì)結(jié)合的位點(diǎn)。將結(jié)合位點(diǎn)突變，以突變探針為對(duì)照，野生型探針出現(xiàn)遷移條帶，而突變探針未出現(xiàn)遷移條帶，則說(shuō)明該探針含有可與蛋白質(zhì)結(jié)合的位點(diǎn)。
探針序列不變，不含修飾基團(tuán)的探針?lè)Q為冷探針。冷探針與標(biāo)記探針競(jìng)爭(zhēng)性地與蛋白結(jié)合，冷探針不顯影出遷移條帶。以冷探針為對(duì)照，標(biāo)記探針出現(xiàn)遷移條帶，而冷探針遷移條帶減弱或消失，則排除了假陽(yáng)性干擾，增加實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性。
使用目標(biāo)蛋白的特異性抗體，蛋白-探針復(fù)合物被抗體識(shí)別并結(jié)合，該三聚復(fù)合物在凝膠電泳中，遷移速率再次增大，出現(xiàn)在蛋白-探針復(fù)合物的上方的超遷移條帶，驗(yàn)證了探針與目的蛋白的特異性結(jié)合。
● 亦可用于研究RNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)RNA序列的相互作用。
● 如需要做超遷移，需提供IP級(jí)別的抗體。
● EMSA與酵母單雜交，可共同驗(yàn)證同一個(gè)問(wèn)題。
● 提取總蛋白
| 項(xiàng)目 | 數(shù)量 | 單價(jià) | 總價(jià) | 周期 |
| 蛋白提取與WB驗(yàn)證 | 1 | 300 | 300 | 5 |
| DNA探針合成（<60bp） | 1 | 450 | 420 | 12 |
| EMSA | 1 | 4500 | 4200 | 20 |
| 報(bào)價(jià) | 5250 | 37 | ||
| 優(yōu)惠價(jià) | 3675 | 37 | ||
● 蛋白表達(dá)與純化
| 項(xiàng)目 | 數(shù)量 | 單價(jià) | 總價(jià) | 周期 |
| 基因合成 | n | 0.8 | 0.8*n | 15 |
| 載體構(gòu)建與足量提取 | 1 | 800 | 800 | 5 |
| 小量表達(dá) | 1 | 800 | 800 | 10 |
| 大量表達(dá)及純化 | 1 | 4000 | 4000 | 18 |
| DNA探針合成（<60bp） | 1 | 450 | 450 | 12 |
| EMSA | 1 | 4500 | 4500 | 20 |
| 報(bào)價(jià) | 10550+0.8*n | 68 | ||
| 優(yōu)惠價(jià) | 6875+0.8*n | 68 | ||
Nuclear factor kappa B/p65 plays a positive role in peroxisome proliferator-activated receptor δ expression in orange-spotted grouper , Epinephelus coioides.
期刊：Fish and Shellfish Immunology IF：3.298 發(fā)表時(shí)間：2020
Binding reactions of Ecp65 and EcPPARδ promoter. Biotin-labelled EMSA probes are incubated with lysates of HEK293T cells including Ecp65 protein. WT, wild-type probe; MT, mutated probe. Positive control indicates EcPPARδ+Protein, negative control indicates EcPPARδ-WT.
文章中EMSA實(shí)驗(yàn)由本公司提供相關(guān)服務(wù)。
Functional Analysis of IRF1 Reveals its Role in the Activation of the Type I IFN Pathway in Golden Pompano, Trachinotus ovatus (Linnaeus 1758).
期刊：Int J Mol Sci. IF：4.183 發(fā)表時(shí)間：2020
Binding reactions of IRF1 and ToIFNa3 prompter. Biotin-labeled EMSA probes were incubated with lysates of HEK293T cells containing ToIRF1 protein.WT,wild-type probe;MT:mutated probe.1,negative control;2,positive control;3,plus ToIFNa3-P2-WT5;4,ToIFNa3-P2-WT5 plus ToIRF1-Flag;5,plus ToIFNa3-P2-MT5;6,ToIFNa3-P2-MT5 plusToIRF1-Flag.
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