技術背景：
        腺病毒（Adenovirus，AdV）是一種非整合型雙鏈DNA病毒，在自然界中廣泛分布。雖然一些類型的腺病毒會引起人胃腸道、上呼吸道或眼部上皮細胞的急性感染；但是應用于基因治療研究的腺病毒是安全的，對人無致病、致畸、致癌的潛在危害。根據Journal of Gene Medicine的統計，截至2006年，在全球1192項基因治療臨床試驗方案中，有305項(26%)使用腺病毒載體，首次超過反轉錄病毒，居第一位。由于腺病毒可以感染呼吸道和消化道，所以它所介導的基因治療可以靜脈注射，還可以通過口服經腸道吸收，或通過噴霧、滴注經呼吸道吸收，使得基因治療方案易于推廣應用。
 
技術原理：
        腺病毒（Adenovirus）是一種無包膜的雙鏈線性DNA病毒，基因組長約36 kb，衣殼呈規則的20面體結構。腺病毒外源基因裝載容量大，且能夠感染絕大多數哺乳動物細胞，包括分裂和不分裂的細胞；除了一些抗腺病毒感染的淋巴瘤細胞。腺病毒適用于在難以轉染的細胞中進行RNA干擾、過表達特定基因和in vivo實驗。
常用重組腺病毒系統組成：腺病毒骨架載體（攜帶腺病毒主要功能基因）、穿梭載體（轉移外源基因表達盒到骨架載體上）。目前應用最為廣泛的是AdMax腺病毒載體系統，骨架質粒和穿梭載體共轉染293細胞后，在細胞內中通過Cre/loxP實現載體重組，進而產生重組腺病毒。通過裂解細胞收獲病毒粒子，病毒粒子經過反復擴增與純化可得到高滴度的腺病毒。
 
技術特點
1、 幾乎可以感染所有類型的細胞，包括分裂細胞和非分裂細胞；
2、 可以獲得復制缺陷型（E1和E3缺失）的腺病毒；
3、 病毒滴度高，產生病毒經過濃縮后可以達到10¹²PFU/mL；
4、 腺病毒載體感染宿主的范圍比較廣，制備容易，操作簡單；
5、 感染細胞時，不整合到染色體中，不存在激活致癌基因或插入突變等危險，生物安全性高。
 
技術應用
1、 應用于體內接種疫苗。用攜帶免疫調節基因或腫瘤特異抗原已近的腺病毒載體轉入相應腫瘤細胞以誘導抗腫瘤免疫反應，可制成具有抗腫瘤活性的瘤苗。
2、 應用于信號轉導，基因轉位，Co-coIP，動物實驗，干細胞研究等科研實驗。
3、 可以完成較高難度的克隆構建，包括具有細胞毒性作用基因的腺病毒構建，在短時間內完成從原始質粒到病毒DNA的構建工作。
4、 產生滴度高，非常適于基因治療。
 
技術流程
1、構建穿梭質粒
以含目的基因的質粒為模板，分別在兩個酶切位點設計引物，PCR擴增目的基因，雙酶切后插入穿梭質粒。
2、細胞轉染
將取骨架質粒和穿梭質粒轉染293細胞。
3、將Pac I消化后的腺病毒表達載體轉染AD293細胞，收獲細胞以制備病毒粗提液。
4、將病毒粗提液感染 293A 細胞以擴增病毒。
5、收集病毒顆粒分裝，-80℃保存。
 
 
腺病毒包裝常用質粒圖譜