抗體稀釋
         抗體用途非常廣泛（請見來邦的一篇總結文章 抗體應用）。多數商品化的抗體是純化的，凍干或保存在緩沖液中。凍干抗體需要在用前在儲存溶液中溶解一下。直接來自供應商或者重新溶解的抗體在儲存溶液中的濃度（終濃度之前）可以是100 ug/ml, 200 ug/ml, 500 ug/ml或1 mg/ml。只有通過蛋白A純化或親和層析純化時，抗體儲備溶液的濃度才有意義。如果抗體未被純化，則抗體儲備溶液的濃度只能表示大量不相關蛋白質的一般濃度。這一點對于抗體的成本計算非常重要。為了方便比較，藥物單克隆抗體通常配制為大于100 mg / ml濃度 [1] 。
 
         血清、腹水或者細胞培養上清中的未純化抗體，或者更多情況是在緩沖液或重溶解的純化抗體，需要根據不同用途稀釋到一定的終濃度。抗體的終濃度很重要。它不僅取決于抗體和靶表位的親和能力，也取決于抗體與其他抗原的非特異性結合（就是交叉反應）。非特異性結合導致背景污染。抗體親和能力越強，終濃度越低；交叉反應越弱，終濃度越低。如果濃度太高，背景太亮而且也越浪費；如果濃度太低，目標蛋白或抗原就不能被檢測到了。抗體濃度需要根據不同樣品不同應用進行優化，來獲得最佳的信號-背景比。
 

應用	抗體終濃度(ug/ml)
	0.00-0.09	0.1-0.9	1-10	10-99	100+
免疫印跡	63	468	574	56	36
酶聯免疫吸附試驗	12	131	299	38	25
免疫組化	9	106	473	107	62
免疫組化 冷凍	0	17	104	38	1
免疫組化 石蠟	12	58	206	70	25
免疫細胞	7	78	612	184	34
中和/封閉	8	103	493	482	84
免疫沉淀	0	15	54	25	12

 
         在文獻中，最常用到的是比例標記1:100和1:1000。來邦的抗體稀釋數據表明在25004篇文獻中有124983個抗體應用給出了稀釋信息，其中117783個用到了比例標記，1:1000的有28991個案例，1:100的有17881個案例，1:200的有14916個案例，1:500的有14741個案例。這一稀釋方式只能用于某一抗體特定母液中，不能推而廣之用于其它情況。例如，抗體母液濃度100 ug/ml按照1:100比例稀釋與1 mg/ml母液濃度的抗體按照1:1000稀釋得到的終濃度是一樣的(1 ug/ml)。來邦的稀釋數據中有6216個案例給出了終濃度。表一列出了根據這些案例統計的不同應用下抗體濃度的分布情況。表二列出了單克隆在不同應用下抗體濃度的統計情況。總體而言，1 ug/ml和2 ug/ml是幾乎所有應用最常用的濃度值，應該被用作滴定實驗的起始點。
 

應用	抗體終濃度(ug/ml)
	0.00-0.09	0.1-0.9	1-10	10-99	100+
免疫印跡	24	150	249	19	11
酶聯免疫吸附試驗	2	58	179	20	17
免疫組化	6	69	238	42	31
免疫組化 冷凍	0	7	54	19	0
免疫組化 石蠟	10	25	92	45	12
免疫細胞	4	50	206	63	11
中和/封閉	8	103	493	482	84
免疫沉淀	0	12	33	7	3

 
         針對特定實驗某一抗體的理想濃度應該通過梯度稀釋母液進行滴定實驗得出。針對流式細胞實驗，嚴格的統計學標準被用于指定合適的抗體濃度 [2] 。在免疫組化滴定實驗中，則用逐級稀釋的抗體重復染同一組織來進行評定 [3] 。
 
抗體滴度
免責聲明: 本文非醫藥建議，任何個人懷疑或者得了某一疾病都應該咨詢有資質的醫學專家。本文僅供對了解多種疾病臨床診斷有興趣的個人參考。抗體滴度和抗體稀釋是不同的概念，它被用于傳染病和其他疾病的診斷。下面討論一些常見問題。
 
抗體滴度如何測量？
         抗體滴度是血液樣品中抗體水平的指標，被定義為血液樣品能夠被ELISA等實驗檢測到陽性結果的最大稀釋濃度。某一抗體的精確滴度值取決于被檢測抗體、所用方法以及進行檢測的實驗室。
 
核酸/抗核抗體
         核酸或抗核抗體被用于自身免疫疾病的診斷，更常用于系統性紅斑狼瘡的診斷。檢測通過間接免疫熒光顯微鏡或ELISA進行。間接免疫熒光分析常被用于人腫瘤細胞系HEp-2的診斷,1:80或更高的滴度可認定為陽性 [4] 。另一方面，如果熒光分析被用于嚙齒類組織基質中，1:20或1:40或更高值可被認定為陽性 [4] 。
 
乙肝抗體
        有幾種針對乙肝的抗體在急性慢性肝炎的診斷和預后中會被檢測到。它們包括針對乙肝表面抗原的抗體(anti-HBs), 抗乙肝核心抗原的IgM抗體(IgM anti-HBc), 抗乙肝核心抗原的IgM和IgG抗體(anti-HBc),以及抗乙肝e抗原的抗體。這些抗體的應用綜合資源可以在這里查到 CDC。通常這些抗體的檢測需要遵守標準的、獲批的，且通常自動化的分析系統，例如Abbott Architect Anti-HBc II用于HBc抗體檢測 [5] ，或者Bio-Rad MonoLISA 的HBs抗體檢測試劑盒 [6] 。
 

參考文獻

1. Das N. Commercializing High-Concentration mAbs. BioPharm International. 2016;29(11):2016.

2. Collino C, Jaldin Fincati J, Chiabrando G. Statistical criteria to establish optimal antibody dilution in flow cytometry analysis. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72:223-6

3. Smith A. Finding the best antibody dilution by repeated immunostaining of the same tissue section. Biotech Histochem. 2014;89:215-9

4. Kavanaugh A, Tomar R, Reveille J, Solomon D, Homburger H. Guidelines for clinical use of the antinuclear antibody test and tests for specific autoantibodies to nuclear antigens. American College of Pathologists. Arch Pathol Lab Med. 2000;124:71-8

5. Ismail A, Devakumar S, Anantharam R, Fletcher G, Subramani T, John G, et al. Low frequency of occult hepatitis B infection in anti-HBc seropositive blood donors: experience from a tertiary care centre in South India. Blood Transfus. 2012;10:230-2

6. Behzad Behbahani A, Mafi Nejad A, Tabei S, Lankarani K, Torab A, Moaddeb A. Anti-HBc & HBV-DNA detection in blood donors negative for hepatitis B virus surface antigen in reducing risk of transfusion associated HBV infection. Indian J Med Res. 2006;123:37-42

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