蛋白樣品脫鹽處理方法比較
信息來源:金開瑞 作者:genecreate 發布時間:2019-02-19 17:30:23
蛋白大分子脫鹽要求在樣品制備中經常遇到,選擇合適的脫鹽方法顯得非常重要;在蛋白回收率、脫鹽效率、蛋白生物活性、操作難易程度、耗時等方面需要綜合考慮,找到合適的脫鹽方式。
下面對透析法、超濾法、脫鹽柱法三種常用的脫鹽方式做一個對比分析,為今后選擇合適的脫鹽方法作為參考。
一、透析法特點:(性價比低)
1.時間長(需要過夜)
2.需要大體積的緩沖液
3.透析袋使用前處理繁瑣
4.透析袋可能會破,導致樣品丟失,重復使用次數少
5.樣品易沉淀失活
6.價格相對低
二、超濾法特點:(性價比一般)
1.時間較長
2.重復使用次數少
3.操作簡單
4.蛋白回收率低
5.蛋白易失活
6.價格較高
三、脫鹽柱法特點:(性價比高)
1.時間短
2.重復使用次數多
3.操作簡單溫和不易失活
4.蛋白回收率高
5.價格相對低
脫鹽柱法案例
層析柱:1.6cm*20cm中壓玻璃層析柱,裝填千純生物Pudex G25 medium填料(柱體積40ml)
樣品:IgG、BSA、Lysozyme(各1mg/mL)
上樣量:流速為50cm/h時,上樣量為3mL(柱體積的7.5%);流速為100cm/h和150cm/h時,上樣量為8mL(柱體積的20%)
下面對透析法、超濾法、脫鹽柱法三種常用的脫鹽方式做一個對比分析,為今后選擇合適的脫鹽方法作為參考。
一、透析法特點:(性價比低)
1.時間長(需要過夜)
2.需要大體積的緩沖液
3.透析袋使用前處理繁瑣
4.透析袋可能會破,導致樣品丟失,重復使用次數少
5.樣品易沉淀失活
6.價格相對低
二、超濾法特點:(性價比一般)
1.時間較長
2.重復使用次數少
3.操作簡單
4.蛋白回收率低
5.蛋白易失活
6.價格較高
三、脫鹽柱法特點:(性價比高)
1.時間短
2.重復使用次數多
3.操作簡單溫和不易失活
4.蛋白回收率高
5.價格相對低
脫鹽柱法案例
層析柱:1.6cm*20cm中壓玻璃層析柱,裝填千純生物Pudex G25 medium填料(柱體積40ml)
樣品:IgG、BSA、Lysozyme(各1mg/mL)
上樣量:流速為50cm/h時,上樣量為3mL(柱體積的7.5%);流速為100cm/h和150cm/h時,上樣量為8mL(柱體積的20%)
流速(cm/h) | 蛋白峰(mL) | 半峰寬(mL) | 鹽峰(mL) | 半峰寬(mL) | Rs |
50 | 15.21 | 3.29 | 30.67 | 5.3 | 1.7998 |
100 | 19.21 | 7.7 | 33.33 | 8.78 | 0.86 |
150 | 18.56 | 8.42 | 34.09 | 8.82 | 0.9 |
上一條:畢赤酵母表達系統在醫藥領域的應用
下一條:線粒體亞細胞器蛋白質分布圖譜
最新動態
-
09.23
中藥的現代詮釋:外泌體如何革新傳統醫學?
-
07.02
1+1>2!深度解析RNA測序數據挖掘邏輯和后期實驗設計思路,輕松研獲10+ SCI
-
07.01
“稻”亦有道——盤點近期水稻研究的重大突破
-
06.28
科學與美學的結合體:植物亞細胞定位技術詳解
-
06.28
“聚焦新質生產力,激發科研新動能”|LCA躋身蛋白互作研究的新銳力量
-
06.05
知無不“研”|一文讀懂免疫共沉淀技術(Co-IP)
-
05.14
四大研究利器(Co-IP、BIFC、Y2H、GST pull-down)助力速配蛋白互作“最佳拍檔”
-
05.14
高效、精準、直觀、實時——取經“蛋白互作研究翹楚”BIFC!
-
05.14
轉染效率低、干擾效果差、重復性欠佳...siRNA研究頻遇“攔路虎”怎么辦?
-
04.22
一文讀懂EMSA技術核心要點,讓“emsa” 秒變“easy”