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蛋白樣品脫鹽處理方法比較

信息來源:金開瑞 作者:genecreate 發布時間:2019-02-19 17:30:23

        蛋白大分子脫鹽要求在樣品制備中經常遇到,選擇合適的脫鹽方法顯得非常重要;在蛋白回收率、脫鹽效率、蛋白生物活性、操作難易程度、耗時等方面需要綜合考慮,找到合適的脫鹽方式。
        下面對透析法、超濾法、脫鹽柱法三種常用的脫鹽方式做一個對比分析,為今后選擇合適的脫鹽方法作為參考。
 
一、透析法特點:(性價比低)
1.時間長(需要過夜)
2.需要大體積的緩沖液
3.透析袋使用前處理繁瑣
4.透析袋可能會破,導致樣品丟失,重復使用次數少
5.樣品易沉淀失活
6.價格相對低
 
二、超濾法特點:(性價比一般)
1.時間較長
2.重復使用次數少
3.操作簡單
4.蛋白回收率低
5.蛋白易失活
6.價格較高
 
 
三、脫鹽柱法特點:(性價比高)
1.時間短
2.重復使用次數多
3.操作簡單溫和不易失活
4.蛋白回收率高
5.價格相對低
 
脫鹽柱法案例
層析柱:1.6cm*20cm中壓玻璃層析柱,裝填千純生物Pudex G25 medium填料(柱體積40ml)
樣品:IgG、BSA、Lysozyme(各1mg/mL)
上樣量:流速為50cm/h時,上樣量為3mL(柱體積的7.5%);流速為100cm/h和150cm/h時,上樣量為8mL(柱體積的20%)
 
不同流速下的參數值
 
流速(cm/h) 蛋白峰(mL) 半峰寬(mL) 鹽峰(mL) 半峰寬(mL) Rs
50 15.21 3.29 30.67 5.3 1.7998
100 19.21 7.7 33.33 8.78 0.86
150 18.56 8.42 34.09 8.82 0.9
 
 



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